青虾冷休克蛋白Y-box编码基因的cDNA全长克隆与表达分析

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1、青虾冷休克蛋白Y-box编码基因的cDNA全长克隆与表达分析孙盛明傅洪拓戈贤平朱健乔慧金舒博张文宜中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水渔业与种质资源利用重点实验室南京农业大学无锡渔业学院摘要：为研究冷休克蛋白Y-box基因在青虾应答环境胁迫过程中所起的调控作用，实验应用RACEPCR技术首次克隆了青虾的冷休克蛋白Y-box基因全长cDNA序列,并利用在线软件对其序列特征进行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR技术对其在青虾不同组织及环境胁迫过程中的表达变化特征进行分析。青虾冷休克蛋白Y-box基因cDNA全长

2、1501bp,包括84bp的5’末端非翻译区(UTR),876bp的开放阅读框(ORF),541bp的3’UTR,开放阅读框编码291个氨基酸。氨基酸相似度比对显示，青虾冷休克蛋白Y-box基因富含高度保守的冷休克结构域。系统进化树分析显示，青虾冷休克蛋白Y-box基因与水蚤等节肢动物冷休克Y-box聚类一支，具有最近的亲缘关系。荧光定量PCR检测显示，冷休克蛋白Y-box基因在青虾不同组织中均有表达，其表达量在肝胰腺组织中最高，使用荧光定量PCR检测青虾冷休克蛋白Y-box基因在低温胁迫和恢复条件下在肝胰腺屮的mR

3、A时空表达情况，结果显示，与对照组相比冷休克蛋Y-box在肝胰腺中的表达量分别在低温和低氧胁迫3,6和12h出现了显著上调，而在恢复刺激后其表达量与对照组差异不显著。此外，本实骑对丫-box进行了原核表达，为进一步研究Y-box基因的功能奠定了基础。关键词：青虾;冷休克蛋口;低温;低氧;原核表达;作者简介：傅洪拓，E-ina订:fuht@ffrc.cn收稿日期：2016-08-31基金：国家自然科学基金(31402280,31672633)Molecularcloningandexpressionanalysisofc

4、oldshockproteinY~boxgenefromorientalriverpawn(Macrobrachiumnipponense)SUNShengmingFUHongtuoGEXianpingZHUJianQIAOHuiJINShuboZHANGWenyiKeyLaboratoryofFreshwaterFisheriesandGermplasmResourcesUtiliz且tion,MinistryofAgriculture,FreshwaterFisheriesResearchCenter,Chines

5、eAcademyofFisherySciences;Abstract：TheY-boxproteinfamilyishighlyconservednucleicacidbindingproteinswhichareconservedfrombacteriatohuman.Inthisstudy,thecDNAencodingcoldshockproteinY~boxfromorientalriverpawnMacrobrachiumnipponense(MnY-box)wasclonedbyusingESTanalys

6、isandrapidampl辻icationofcDNAends(RACE)approach.ThefulllengthcDNAofMnY-boxwas1501bp,consistingofa5’untranslatedregionof84bp,a3’untranslatedregionof541bp,andanopenreadingframeof876bp.Thededucedproleinhad291aminoacidresidueswithmolecularmassof31.48kDa>Basedonthepro

7、teinsimilaritycomparison,theY-boxproteinfennilywasveryconservativeinCSDdomain.PhylogcnctictreeanalysisstatedthatorientalriverprawnhastheclosestrelationshipwithDaphniapulex.Quantitativereal-timeRT-PCRanalysisshowedthattheMnY-boxgenewasexpressedinhaemocytes,hepato

8、pancreas,muscles,gill,brain,testis,ovaryandintestineswiththehighestlevelofexpressioninthehepatopancreas.Afterenvironmentallowtemperatureandrecoverychallenge,therelati