-高效液相色谱法- ()

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1、第二十章高效液相色谱法Highperformanceliquidchromatography陈睿婷液相色谱1、按流动相与固定相的分子聚集状态分类流动相固定相气体(gas,G)液体(liguid,L)超临界流体(supercrtticalfluid,SF)固体(solid,S)GSCLSCSFSC液体(liguid,L)GLCLLCSFLC化学键合相(bondedphase,BP)GBPCLBPCSFBPC气相色谱液相色谱超临界色谱高效液相色谱(HighPerformanceLiquidChromatograph

2、y，HPLC)高效液相色谱法（HPLC）是20世纪60年代末70年代初发展起来的一种新型分离分析技术，随着不断改进与发展，目前已成为应用极为广泛的化学分离分析的重要手段。它是在经典液相色谱基础上，引入了气相色谱的理论，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，因而具备分离效率高、选择性好、分析速度快、检测器灵敏度高、操作自动化和应用范围广的特点。高分离效率的核心速率方程（vanDeemter方程）：涡流扩散项分子扩散项传质阻抗项H=A+B/u+C.u小颗粒填料高柱效高压流动相高柱压100mm→5mm一、

3、HPLC与经典LC区别经典LCHPLC柱内径1~3cm→2~10mm填料粒径>100μm→<10μm常压流动相→高压(40-50MPa)可在线检测柱效低（H↑，n↓）分析周期长柱效高（H↓，n↑）分析时间大大缩短二、HPLC与GC差别分析对象：GC：热稳定，低沸点样品（占有机物20%）HPLC：能溶解的样品（占有机物20%）GCHPLC流动相：GC：气体，N2、H2、He，与组分无作用力。HPLC：溶液，流动相与组分间有亲合作用力，对提高柱的选择性、改善分离起很大作用操作条件：GC：常压，高温（程序升温）。HP

4、LC：高压，常温（梯度洗脱）本章内容高效液相色谱法的主要类型1固定相和流动相2速率理论和分离方法选择3高效液相色谱仪4超高效液相色谱法5定性与定量分析6分配色谱吸附色谱液固色谱法液液色谱法根据固定相的不同根据分离的原理不同高效液相色谱法亲和色谱手性色谱分子排阻色谱离子交换色谱第一节、高效液相色谱法的主要类型HPLC固定相液－固吸附色谱固定相(吸附剂）液—液分配色谱固定相固定相分类涂渍（几乎不用）化学键合相（常用）涂渍：易流失，液膜厚化学键合：牢固，单分子层利用化学反应将固定液的官能团键合在载体表面。键合反应：目

5、前使用的化学键合相主要为硅氧烷（Si-O-Si-C)型键合，以氯硅烷与硅胶进行硅烷化反应制得。以C18为例：化学键合相化学键合色谱法：以化学键合相为固定相的色谱法，简称键合色谱法(bondphasechromtography，BPC)。化学键合相类型正相化学键合相色谱法、反相化学键合相色谱法非极性键合相、极性键合相、极性键合相1、正相键合相色谱法固定相：如氰基（－CN）、氨基（－NH2）或二羟基键合硅胶。流动相：非极性或弱极性溶剂（烃类）加极性调整剂（醇类）适用范围：溶于有机溶剂的极性至中等极性的分子型化合物。

6、分离选择性：键合相种类、流动相种类、试样性质。分离机制？有的认为是分配作用，有的认为是吸附作用。分配：把有机键合层作为一个液膜看待，溶质在两相间进行分配，极性强的成分，K大，tR大吸附：溶质与键合极性基团间的诱导、氢键和定向作用。硅胶柱分离苯的衍生物2、反相键合相色谱法固定相：非极性键合相，如十八烷基硅烷（C18，ODS）、辛烷基键合硅胶（C8）、苯基、芘基流动相：水为基础溶剂，加入一定量与水混溶的极性调整剂，常用甲醇－水、乙腈－水等应用：最广，非极性至中等极性的组分，（还有有机酸、碱及盐等）分离机理：分子中

7、的非极性部分与固定相表面上的疏水烷基产生缔合作用，使它保留在固定相中；而另一方面，被分离物质的极性部分受到极性流动相的作用，促使它离开固定相，并减小其保留作用。保留行为的主要影响因素：1、样品的分子结构（极性）极性越弱，疏水性越强，k越大，tR也越大。同系物碳数越多，极性越弱，k越大；引入极性取代基，降低疏水性，k值变小。2、固定相键合烷基的疏水性随碳链的延长而增加，溶质的k也增大。C18分离效果好，C8，C1用于快速分离。硅胶表面键合烷基的浓度越大，则溶质的k越大。3、流动相极性越强，洗脱能力越弱，使样品的k

8、越大溶剂种类：水为弱溶剂，醇为强溶剂溶剂比例：水的比例增加，使k增大中性盐的加入：使中性样品的k增大pH：影响弱酸、弱碱的离解程度，解离程度越高，与流动相作用越强，k越小。（离子抑制色谱）离子抑制色谱：分离3≤pKa≤7的弱酸及7≤pKa≤8的弱碱流动相的pH降低，弱酸k增大，tR增大；弱碱k变小。反相高效液相色谱法测定枸杞中有机酸的含量色谱柱：C18柱分离碱类：用烷基磺酸盐为离子对试