DB51 T 808-2008 杂交玉米品种真实性和纯度SSR分子检测技

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1、ICS65.020.99B21DB51四川省地方标准DB51/T808—2008杂交玉米品种真实性和纯度SSR分子检测技术方法IdentifyinggenuinenessandpurityofmaizehybridusingSSRmolecularmarker2008-6-6发布2008-9-1实施四川省质量技术监督局发布DB51/T808—2006目次前言.................................................................................I

2、I1范围................................................................................12规范性引用文件......................................................................13术语和定义..........................................................................14原理..............

3、..................................................................25试验方法……………………………………………………………………………………………………….26核心引物筛选………………………………………………………………………………………………….27品种纯度检测程序…………………………………………………………………………………………….28品种真实性检测程序………………………………………………………………………………………….29结果计算………………

4、……………………………………………………………………………………….310检验报告……………………………………………………………………………………………………...3附录A（规范性附录）检验报告..........................................................4IDB51/T××—2007前言本标准的附录A为规范性附录。本标准由四川省农业厅提出并归口。本标准由四川省质量技术监督局批准。本标准起草单位：四川省种子站、四川省农业科学院作物研究所、成都市种子站。本标准主要起草

5、人：杨俊品、苏秀、何芳、林勇、谭君IIDB51/T××—2007杂交玉米品种真实性和纯度SSR分子检测技术方法1范围本标准规定了玉米(ZeamaysL.)单交种、自交系的品种真实性和纯度的SSR分子标记检测方法和对检测结果的判定标准。本标准适用于玉米单交种、自交系的品种真实性和纯度鉴定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB4404.1粮食作物作物种子禾

6、谷类GB／T3543.4农作物种子检验规程发芽试验GB／T3543.5农作物种子检验规程真实性和品种纯度GB/T19557.1植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南总则NY/T1432玉米品种鉴定DNA指纹方法BMTguidelines(proj.3)分子标记选择与DNA指纹库构建指南3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1简单重复序列SSR（SimpleSequenceRepeats）又称微卫星序列或短串联重复序列，是由几个核苷酸（1-5个）为重复单位聚集而成的长达几十个至几百个bp（一般为100-200bp

7、）的串联重复序列。3.2聚合酶反应PCR（PolymeraseChainReaction）一种用于在体外扩增DNA序列的技术程序。模板DNA经高温变性为单链，在DNA聚合酶和适宜温度下，两条引物分别与DNA模板两条链上的一段互补序列发生退火，并在DNA聚合酶的催化下以四种dNTP(deoxyribonucleosidetriphosphate，脱氧核苷三磷酸）为底物，使退火引物延伸从而合成DNA。如此变性退火和合成DNA反复循环，使位于两段已知序列之间的DNA片段呈几何倍数扩增。3.3引物Primer1DB51/T××

8、—2007具有游离的3’-OH末端及特定序列的寡核苷酸短片段，与DNA模板结合后启动PCR反应。3.4核心引物CorePrimer多态性、稳定性、重复性等综合特性好，适用于真实性和纯度鉴定优先选用的引物。核心引物的选择参考BMTguidelines(proj.3)。4原理简单重复序列（SSR）分布于玉米整个基因组，每个位点上重复单