植物组织培养技术交底

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1、植物组织培养技术　植物组织培养是70年代快速发展并趋成熟的现代生物技术，是在含有营养物质及植物生长调节物质的培养基中离体培养植物组织(器官或细胞)的技术。它的理论依据是植物细胞的全能性，即植物体的每一个细胞都有分化成一个完整植株的潜在能力。该技术在品种选育、名特优品种的快速繁殖、自然资源的保护、品种质量的提高、濒危植物种质保存等诸方面都表现出巨大的应用前景，取得了明显的经济效益。　　组织培养前景广阔　　植物组织培养技术一诞生就表现了强大的生命力和美好的前景。它在细胞学、遗传学、农学、生理学、生物化学等学科的基础理论研究中，成

2、了一种常用的生物学技术;在实际应用中也发挥了巨大作用，取得了显著的经济效益和社会效益。　　育种：通过组织培养技术，结合诱变育种技术，成功地培育出许多优良品种。如抗黄化叶病的大麦品种;培育出脱病毒的马铃薯、甘蔗品种，使马铃薯产量增加十多倍;选育出早熟(比母本提早15天)、优质(含糖量9.5%)、高产(单果平均重106克)的京早三号桃(中科院植物所培育)等等，这些例子不胜枚举。　　快速繁殖：应用组织培养技术可使某一个优良品种得到快速繁殖，可在一年内从一个芽或一张叶片，培养与繁殖成几十万或上百万株小苗，使得该优良品种很快得以推广。

3、如浙江省金华婺东葡萄良品场，1990年将日本引进的葡萄品种栽培成功后，我们通过快速繁殖，使每月的增殖系数达到6～9，可使一个芽在一年之内产生100万个芽。快繁技术在花卉、果树等经济植物的优良品种繁育中，取得了良好的经济效益。　　名、特、优、稀植物品种的保存与繁殖：许多名贵植物(如兰花)由于繁殖慢或困难，数量不多;而众多的野生植物(如花卉、药材)由于人们过度的采伐，变成濒危植物。这些品种的保存与繁殖越来越显得重要与紧迫。应用组织培养技术，不仅可以在实验室条件下保存种质，还可以进行工业化生产，大量繁殖来满足人类生活的需求。　　无

4、土栽培：现代正在快速推广的无土栽培技术，就是建立在组织培养的基础理论之上的，特别是无土栽培中的营养液成分，与组织培养的培养基配制基本相似。无土栽培以其高产、低成本、低污染与低有害物质的残留而倍受人们的欢迎。　　快速繁殖　　植物快速繁殖技术自60年代开始用于兰花生产以来已得到快速发展。开始时主要应用于花卉生产，现逐渐应用于蔬菜、果树等其他园艺作物，近年来又应用于造林树种的繁育上。现已有数百种植物可通过组织培养进行快速繁殖，并进行了商品化的大规模生产。其中包括用于切花生产的香石竹、唐菖蒲、非洲菊、花烛、百合、菊花等;还有兰花、非

5、洲紫罗兰、大岸桐、杜鹃和某些蕨类植物和观叶植物;以及草莓、芦笋、香蕉、葡萄、桉树等经济作物。在很多国家已成为一种新兴的产业。　　该技术的主要优点有：　　①所需要的植物材料少;②繁殖速度快，不管从总体上还是单位面积上，其繁殖速度都大大快于常规方法;③如结合茎尖培养等脱病毒技术，可改良作物品种。　　快速繁殖技术一般可分成四个阶段，即无菌培养物的建立，芽的增殖，诱导生根和试管苗的移栽。　　无菌培养物的建立　　要选择合适的外植体(用于组织培养的植物材料)，主要有芽(顶芽为主)、叶片、带芽的茎切段等。取得的外植体首先要进行消毒灭菌工作

6、：用自来水冲洗干净→吸水纸吸干表面水分→70%酒精浸5～10秒→无菌水冲洗→2%～10%的次氯酸钠溶液浸泡6～15分钟→无菌水冲洗三次→接种于培养基上。　　培养基是组织培养成功与否的关键，不同的培养目标可选择不同的培养基。常见的有MS、LS、B、Nitsch、White等培养基，它们的主要成分可分为五大类：　　①无机营养物，有氮、磷、钾、钙、镁、硫、铁、硼、锰、锌、钼、铜、钻等矿质元素，相当于日常植物栽培中的肥料所含的物质;②碳源，主要有蔗糖、葡萄糖、果糖等，相当于光合作用所生产的营养物质;③维生素，它们有利于离体培养物的发

7、育，有维生素B、维生素B、生物素、烟酸、肌醇芽;④有机附加物，有橄子汁、果汁、琼脂等;⑤生长调节物质，主要有生长素和细胞分裂素，它们的比例调节着培养物的生长与分化方式，当生长素和细胞分裂素比例低时，有利于芽的生长与分化，当其比例高时，有利于根的诱导。　　培养基配制好后，装在三角烧瓶或试管等玻璃容器中，加上棉花塞(或铝铂纸)后进行高压灭菌。高压灭菌一般在高压锅内进行，在120℃，1.12公斤/厘米压力下，保持15～20分钟。灭菌后的培养基可用于接种培养物，或在10℃下保存备用。　　灭菌后的外植体在无菌箱(或超净工作台)上接种到

8、灭菌后的培养基上，然后放置于培养室中培养。培养过程要求一定的光照时间(如16小时/天)、光照强度(2000～5000勒克斯)和温度(20～30℃)。不同的植物，不同的培养目的对培养条件的要求不同。　　芽的增殖　　芽的增殖是快速繁殖技术最重要的一环。芽培殖的途径主要有两条：　　①促进侧芽的形