达肝清颗粒提取工艺探究

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1、达肝清颗粒提取工艺探究作者:吴玉强,邓家刚,王志萍,冯旭【摘要】目的优选达肝清颗粒最佳的提取工艺。方法采用正交实验法,以人参皂昔Rg1含量及干膏率作为评价指标,筛选最佳的提取工艺。结果达肝清颗粒最佳提取工艺为:药材加10倍量水提取2次,1h/次,第1次提取前先将药材浸泡1ho结论优选出的达肝清颗粒的提取工艺稳定合理可行。【关键词】达肝清颗粒;提取工艺;正交设计;人参皂昔Rg1病毒性肝炎是由多种肝炎病毒引起的常见传染病,我国病毒性肝炎发病数位居法定管理传染病的第一位,仅慢性乙型肝炎病毒携带者就达1.3亿[1]o慢性乙型肝炎病程迁延,如得不到及时的治疗,将会发展为肝硬化甚至肝癌,

2、严重危害人类健康[2卜达肝清颗粒原方系长期用于临床实践的经验方——达肝清汤剂。其由广西特色药材绞股蓝、三姐妹、黄根等7味药组成,具有清热解毒、益气健脾、利湿等功效。现代药理研究表明达肝清有保肝降酶、抗乙肝病毒、提高免疫功能[3k抗肝纤维化[4]的作用。为了将达肝清汤剂更好地应用于临床上,广西中医学院研究开发出服用、携带方便的达肝清颗粒剂,并对其制备工艺进行了研究。现报道如下。1仪器和材料1.1仪器与设备RE-52A旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);AgilentHOO(DAD、VWD)高效液相色谱仪;HB43水分测定仪(梅特勒-托利多中国地区)o1.2材料绞股蓝、三姐妹(三叶

3、香茶菜X黄根等多味药材均购自南宁市日益旺中草药材经营部,经鉴定为正品。人参皂昔Rg1标准品购自中国药品生物制品检定所(批号:110703-200322'2方法与结果2.1考察指标的确定达肝清颗粒处方中有多味药材,有效成分众多,因此以干膏率作为考察指标之一较全面合理,君药绞股蓝的主要有效成分为人参皂昔Rg1,故将人参皂昔Rg1作为考察指标。2.2考察指标的测定方法2.2.1干膏率的测定方法按处方比例称取黄根、三姐妹等药材适量,共9份,根据L9(34)正交实验设计表,将药材浸泡适当时间后提取。提取完毕后浓缩到密度1.05g/ml(60-70°C),醇沉(水提液:95%乙醇=1:2

4、摩沉24h),弃去沉淀,得醇沉液,测量其体积,备用。将不同条件下的水提液分别浓缩至相对密度1.20(65°C),称重。称取2g,分别置于已恒重的蒸发皿中,水浴蒸干,并于105°C干燥至恒重,取出,置于干燥器中放置30min,迅速精密称定干膏重量。干膏率(%)二干膏重x浓缩液总重取样量x生药总量x100%2.2.2人参皂昔Rg1的测定方法色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,乙騰-水(20:80內流动相检测波长为203nmo柱温为35°C,流速为1ml/min,理论塔板数按绿原酸峰计应不低于4000o对照品溶液的配制:精密称取人参皂昔Rg1适量,加甲醇溶解,

5、制成每毫升含人参皂昔Rg12.03mg的溶液,即得O供试品溶液的配制:精密量取50ml醇沉液放入蒸发皿中,水浴蒸干,加30ml水溶解,用水饱和正丁醇萃取3次,30ml/次,合并萃取液,再用氨试液(氨水:水=1:1.5)洗两次,40ml/次,蒸干正丁醇,加适量甲醇溶解,将甲醇液移至10ml容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。取部分溶液离心20min(12000r/min),即得。测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10pl,注入液相色谱仪测定其峰面积,计算人参皂昔Rg1含量。2.3正交实验法优选提取工艺2.3.1实验设计选择对提取效果有重要影响的3个因素(加水量、提取时间、提

6、取次数)作为考察因素,每个因素选取3个水平,编制4因素3水平表。见表表1水提工艺因素水平(略)2.3.2正交实验安排及结果按处方的一定比例称取药材,根据L9(34)正交表安排,分别以干膏率、人参皂昔Rg1含量为考察指标进行试验。结果见表2〜4。液相图见图1〜2。表2L9(34)正交实验安排和结果,表3方差分析(以干膏率为考核指标),表4方差分析(以人参皂昔Rg1为考核指标)(略)□从以上方差分析结果可以看出:以干膏率为评价指标时,A,B因素有显著性影响,影响因素顺序为:B>A>C,且A2,B2,C3最佳,所以最佳工艺为A2B2C3;以人参皂昔Rg1为评价指标时,B

7、因素有显著性影响,影响因素顺序为:B>A>C;且A2,B2,C3最佳,所以最佳工艺为A2B2C3o综合比较上述结果,由于C因素各水平间的差异不显著,从实际生产节约时间和节约能源考虑,B因素选第2水平,A因素选第2水平,C因素选第2水平,即A2B2C2O即加10倍量水提取2次,1h/次,第1次提取前先将药材浸泡1ho2.4最佳提取工艺验证为了进一步验证正交试验结果的准确性,以确保提取工艺合理可行,按上述工艺条件A2B2C2,重复安排3批试验。结果见表5。表5水提工艺验证结果(略)3讨论采用正交

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