链球菌和葡萄球菌分离鉴定（可编辑）

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1、青岛农业大学兽医微生物学课程论文题目:姓名:学院:班级:学号:任课教师:链球菌和葡萄球菌分离鉴定动物科技学院马业科学12012012温建新二0—四年四月十二日链球菌和葡萄球菌分离鉴定班2012指导教师温建新摘要：为了鉴别致病性葡萄球菌和链球菌，我们将用过氧化氢试验，□露醇试验，凝固他试验等方法进行鉴别，并根据他们的不同性质出现不同的结果，得出菌的种类。关键词：匍萄球菌；链球菌引言：匍萄球菌是一群革兰氏染色阳性球菌［1］,因常常堆聚成術萄出状而得名。多数術萄球菌为非致病菌，少数可致病。代表种有金黄色葡萄球菌。白色葡

2、萄球菌、柠檬色葡萄球菌等。典型的葡萄球菌为圆形或卵鬪形，常徊萄状排列，革兰氏染色阳性，无鞭毛，无荚膜，不产生芽胞，呈球形或稍呈椭I员I形，直径1.0um左右，排列成葡萄状。葡萄球菌无鞭毛，不能运动。无芽胞，除少数菌株外一般不形成荚.膜。易被常用的碱性染料着色，其衰老、死亡或被白细胞吞噬后，以及耐药的某些菌株可被染成革兰氏阴性。营养要求不高，在普通培养基上生长良好，在含有血液和葡萄糖的培养基屮生长更佳，需氧或兼性厌氧，少数专性厌氧【2】多数葡萄球菌能分解匍萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产住气。致病性菌株能分解甘露醇.链

3、球菌是一类球形的革兰氏阳性细菌【2】，属丁厚壁菌门的一个属。这些细菌细胞分裂时总是沿一个轴，所以通常成对或者链状的。因为这些特征，他们被称作“链球菌”.球形或卵圆形，直径0.6〜1.0um,多数星链状排列，短者4〜8个细菌组成，长者有20〜30个细菌组成。链的长短与菌种及生长环境有关，在液体培养基中形成链状排列比在固体培养基中形成的链长。幼龄菌大多可见到透明质酸形成的荚膜，如延长培养时间，荚膜町被细菌自身产生的透明质酸卿分解而消失。无芽胞，无鞭毛，有菌毛样结构，含M蛋白，革兰氏染色阳性。能发酵简单的糖类，产酸不产

4、气，需氧或兼性庆氧，有些为厌氧菌。营养耍求较离。［1］普通培养基屮需加有血液、血清、葡萄糖等才能生长。血琼脂平板上形成灰白色、有乳光、表面光滑、边缘整齐、直径0.5-0.75mm的细小菌落，不同菌株有不同溶血现彖。肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌均产生a溶血环【3】。1材料与方法1.1材料1.1.1待鉴定菌A.B各一，健康兔。1.1.2试剂及其配制1:5兔血浆，革兰氏染色液，百分之三的过氧化氢溶液1.1.3器材：普通营养琼脂平板，血琼脂平板，甘露醇微量发酵管。无菌注射器,碘酒棉，酒精棉，无菌离心管，无菌平皿，离心机，

5、接种环，小试管，载玻片。1.2方法1.2.1划线分离，曲接种环以无菌操作分别沾取少许待分离的材料A,B.o在无菌平板表面进行平行划线、，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开來。如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。分别取待测A,B菌于普通培养基划线培养和血琼脂培养基。置于37摄氏度培养18至24小时。1.2.2血平板制作取营养琼脂（PH7.6）,加热使其溶解待冷至45-50°C,以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加兔血5-10毫升，轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管

6、，制成斜面备用1.2.3兔心脏取血法和大、小鼠心脏取血法类似，且比较容易学握。将兔固定在手术台上，用碘酒酒精消毒皮丿庆，选择心搏最明显处穿刺，针头刺入心脏后即有血液涌入注射器。取得所需血量后，迅速将针头拔出，这样心肌上的穿孔易于闭合。经6〜7天后，可以重复进行心肌采血。1.2.4生化鉴定：分别取待测菌A,Bo取2毫升百分之三的过氧化氢溶液，加入干净的小试管中，用细玻璃棒蘸取试验菌，插入过氧化氢液面下，发现B有气泡产生，为葡萄球菌，A为链球菌。125形态鉴定：进行革兰氏染色。126凝固酶试验：挑取细菌菌苔，混悬丁-

7、1:4稀释的0.5毫升兔血浆，同时用已知阳性菌株作对照，置37摄氏度培养2至4小吋，观察结果，凝固者B为阳性。127甘露醇发酵实验：将各种葡萄球菌分别接种于甘露醇发酵管屮，置37摄氏度培养24小吋，观察情况。2结果与分析2.1普通琼脂是直径1到2毫米的白色或米色略微凸起的光滑球面,菌落呈圆形,湿润,不透明,边缘齐整。血液琼脂平板：多数病菌株形成明显的溶血。但链球菌比葡萄球菌的效果明显。2.23氧化氢酶试验若有气泡产生，B则为葡萄球菌，A否则为链球菌。2.3凝固猶试验：挑取细菌菌苔，混悬于1:4稀释的0.5毫升兔血

8、浆，同吋用已知阳性菌株作对照，置37摄氏度培养2至4小时，观察结果，凝固者为阳性。2.4廿露醇发酵实验：将各种葡萄球菌分别接种于廿露醇发酵管屮，置37摄氏度培养24小时，观察情况。3.1结果讨论经试验结果鉴定A为链球菌，B为金黄色葡萄球菌。3・2操作的过程中可能出现的问题：触媒实验3%H2O2溶液要新鲜配制。②不宜用血琼脂平板上生长的菌落，因红细胞含有触酶，可致假阳性反应