资源描述：
《欧鳗嗜水气单胞菌病的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、欧鳗嗜水气单胞菌病的研究近年来，欧鳗的大规模集约化养殖已在我国H益增多。但是，随着养殖规模的扩大，养殖密度的不断提高，各种影响欧鳗成活率的问题也日渐增多，而由嗜水气单胞菌作为病原的欧鳗暴发性传染病则是其屮一个突出问题。木文对嗜水气单胞菌的生理生化特性、致病因子、致病条件等作了一系列的初步研究，旨在为欧鳗暴发性传染病的防治提供冇力的理论依据，更好地推动欧鳗养殖业向着更强、更快、更健康的方向发展。一、材料与方法1.病原菌的分离采用普通蛋白琼脂培养基，其成份为胰蛋白腺10g,酵母膏10g,氯化钠5g,琼脂18〜20g,pH7.2〜7.4,15磅20分钟灭菌备用。取患典型病症的鳗鱼，以无菌解剖刀将溃
2、烂表层切开，以接种环迅速挑取少许病灶深层粘液，进行琼脂平板划线分离。28°C,24小时常规培养后，岀现一-些形态基本一致的菌落。挑取单菌落，进行纯培养，然后转接斜面备用。2.致病性实验将实验菌种接斜面，28°C培养约24小时，每个斜面中加入无菌生理盐水5〜10mL,制成浓厚菌悬液。取1讥菌悬液，以活菌平板计数法测定细菌数，吸取O.lniL菌悬液，注入健康鳗鲫腹腔屮（注射前已置水族箱屮观察5天），同时设对照，置24〜28°C水族箱中观察其症状。3.病原菌的形态观察和生理生化实验采用致病力较强的菌株Ah3、Ah26、Ah38在28°C条件下，经24小吋培养，进行革兰氏染色，鞭毛染色，观察其形态及
3、其它生理生化实验。4.血清型研究1）采用小白兔（从市场上购买）制备抗血清。攻毒用健康鳗鱼（由养鳗场捉供）,规格为40〜50g左右，试验前观察5〜7天证实健康无病。2）将具有强致病力的Ah3、Ah26、Ah38等菌株分别于营养琼脂上培养24小时，刮取菌苔，用无菌生理盐水冲洗菌体三次，将菌体分别用0.35%福尔马林灭活25小时，制得全菌抗原（WC抗原），4°C冰箱保存备用；3）以0.35%福尔马林灭活体0.ImL（浓度为1X10E9cel1/mL）加等量弗氏完全佐剂混合均匀，皮下多点免疫口兔，以后每隔一周耳静脉加强免疫，并逐次加大抗原剂量，获满意效价后颈动脉放血取血清。4）试管凝聚法：免抗血清（
4、1:60）稀释0.25mL,加入0.25mL浓度为15R/mL抗原，充分摇匀，4°C,12小时，观察其凝聚反应。5•嗜水气单胞菌毒力（LD50）测定Ah菌株接种营养肉汤，28°C培养24小时，测菌浓度，用无菌生理盐水10倍系列稀释菌体，腹腔注射健康鳗鲫，实验水温25°C,记录死鱼数及注射菌量，按Reed—Muench法计算LD50。6.溶血活力测定将Ah菌株纯分离物接种丁•10%兔血平板，28°C培养过夜，以溶血圈直径与菌落Z比示溶血活力。6.致病条件的探索性测定采用致病力较强的Ah38号菌株为攻毒菌株，调整水族箱内水休环境，使其含菌量大约为5〜104cells/niL,在不同条件下，使健康
5、鳗鲫浸浴其中，以观察嗜水气单胞菌的条件致病性。二、实验结果1・本实验共分离出菌株63株，其屮经人工感染具冇致病力的菌株冇8株，在这8株菌中，乂有3株菌的致病力是极强的。2.病原菌的形态观察及生理生化特性。本实验结果表明,我们从病鱼中就分离到的Ah3、Ah6、Ah7、An26、Ah31、Ah38、Ah5kAh53等菌株的形态、培养特性及生理生化反应基本一•致，现以Ah38号菌株为代表简述如门在营养琼脂平板上，28°C,18〜24小时培养菌落圆形、湿润、表而光滑、低凸，边缘整齐，半透明，乳口色，直径1〜l・5nm)左右，有异味。在肉汤培养基中，28°C,18〜24小时培养液均匀混浊，表面呈雾状薄
6、膜，一摇即散，在高倍显微镜下，呈两端圆形的直杆菌，单个或成对，能运动，无芽胞，无荚膜，革兰氏逖角阴件・出错观率白单牛帥丰C示据这些培养特性「我和确认所分离到的菌株属于嗜水气单胞菌(Aeromonushydrophila),它们是引发欧洲鳗暴发性传染病的主要病原，这一点已得到了大多数学者的一致公认。3•我们以致病力实验中致病能力较强的Ah3、Ah26、Ah38号菌株制备兔抗血清，并与其它5株Ah菌株进行了试管凝聚试验，结果表明，Ah3与Ah38屈同一血•清型，Ah26屈另一血清型，其余5株分屈这两个血清型，反应专一性强，没有发现能同时与两种血清型反应的菌株。4.嗜水气单-胞菌毒力(LD50)测
7、定实验结果向我们表明，八株Ah菌株对健康鳗鲫均有强的毒力，最强的Ah38号菌株，其LD50低于104CFU,同时■，毒力强的菌株具菌溶血圈直径与菌落直径之比大于2,表明它有较强的溶血活力，其它LD50较低的菌株其溶血活力也较低。这个实验结杲启示我们，嗜水气单胞菌的毒力与其溶血活力冇着一定的线性关系，不同血清型的菌株其溶血能力不一致，在我们的实验屮，以Ah38号菌株所代表的血清型有着更强的致病力，这为我们今后寻
