胚胎大鼠背根神经节神经元的培养与纯化

《胚胎大鼠背根神经节神经元的培养与纯化》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、·1152·解放军医学杂志2006年12月第31卷第12期MedJChinPLAVoI31No12December2006胚胎大鼠背根神经节神经元的培养与纯化张军许百男李翀孟祥辉摘要目的建立一种简单可行的胚胎大鼠背根神经节神经元培养和纯化方法。方法取胚胎大鼠背根神经节，通过胰蛋白酶消化、抗有丝分裂药物纯化等方法获得背根神经节神经元。采用降钙素基因相关的缩氨酸和神经丝蛋白双重免疫细胞化学染色法鉴定并测定神经元的纯度。结果分离培养的背根神经节神经元在适宜的培养基中生长良好，纯度可达到93%左右。结论此培养方法简单、易行，能培养和纯化出大量背根神经节神经元。关键词细胞培养；神经节，脊；神经元中国

2、图书资料分类号R394.26PrimarycultureandpurificationofembryonicdorsalrootganglionneuronsZhangJun，XuBainan，LiChong!"#$.DepartmentofNeurosurgery，GeneraIHospitaIofPLA，Beijing，100853，ChinaAbstractObjectiveToestabIishasimpIeandreIiabIemethodforprimarycuItureandpurificationofembryonicdorsaIrootgangIionneurons.Me

3、thodsDorsaIrootgangIions（DRG）fromratembryoswereisoIatedundermicroscopeanddissociatedintrypsin.Thedissocia-tedneuronsweretreatedwith5-fIuorouraciIforpurification.ImmunocytochemistrywasperformedbydoubIestainingwithanti-caIcitoningene-reIatedpeptideandanti-NF200antibodiestoevaIuatethepurificationrate

4、ofDRGneurons.ResultsIsoIatedandcuIturedDRGneuronssur-vivedandgrewniceIyinthebasismediumforneurons，andthepurifiedrateofDRGneuronscouIdreachtoaround93%.ConclusionTheabovemethodisveryusefuItoobtaindorsaIrootgangIionneuronsandtopurifytheneuronaIpopuIation.KeywordsceIIcuIture；gangIia，spinaI；neurons背根神经

5、节神经元（dorsaIrootgangIionneurons，入1mI多聚赖氨酸，包被1h后吸除多聚赖氨酸，在超DRGn）作为周围神经系统主要的传入神经元，是感觉净台内晾干1h，最后用PBS冲洗，晾干备用。信号传导的重要中继站。近年来，关于DRGn的神经1.3显微手术分离背根神经节将孕鼠置于含乙醚生物学研究日益活跃，如DRGn上离子通道变化在痛的容器内，麻醉后用70%乙醇消毒腹部皮肤，剖开腹腔［［1［［2觉中的意义、DRGn发生轴突的体外延长培养、取出胚胎。去除胎鼠的头、尾和腹部，在解剖显微镜［［3DRGn在脊髓损伤修复中的作用等。因此，有必要建（OIympus，日本）下用显微镊分开椎体，

6、暴露椎管内的立一种高效、稳定的DRGn体外培养体系。本研究应脊髓，并小心将脊髓从椎管内提出。背根神经节用胚胎大鼠背根神经节，采用胰蛋白酶消化、抗有丝分（DRG）呈串珠样位于脊髓的两侧。逐个摘除脊髓两旁裂药物纯化等方法，获得了大量纯化的DRGn，现报道的DRG，置于4CL-15培养基中备用。如下。1.4DRGn的培养和纯化将DRG自L-15培养基移入4mI0.25%胰蛋白酶内，37C消化40min。1000r/1材料与方法min离心5min，吸去胰酶消化液，加入FBS中止消化。1.1实验动物和主要试剂孕15天（E15）的SD大1000r/min离心5min，吸除FBS换入常规培养基，并用鼠。

7、Leibovitz’sL-15培养基、NeurobasaI培养基、胎牛细头吸管反复吹打制成单细胞悬液。细胞计数后，按6血清（FBS）、葡萄糖和B-27添加剂、神经生长因子10/mI密度接种于预先已包被多聚赖氨酸的6孔细胞（NGF）购自Gibco公司，多聚赖氨酸（PLL）、胰蛋白酶培养板内。37C、5%CO2条件下培养48h后，更换含5-（Trypsin）、氟尿嘧啶（5-FU）购自Sigma公司；免疫组化FU的抗有丝分裂培