免疫血清鉴定

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1、免疫血清鉴定兔抗牛血清白蛋白免疫血清的制备及鉴定【摘要】目的：制备兔抗牛血清白蛋白血清，并对其进行效价的鉴定。方法：由牛血清和石蜡油、羊毛脂、卡介苗等进行研蘑制成弗氏完全佐剂，对兔子不同部位进行一周一次连续四周的抗原免疫，釆取颈动脉放血收集并分离血清，再通过双向免疫扩散实验进行血清效价的鉴定。结果：：双向琼脂扩散在BSAO.5g/mL的浓度时，测得抗血清效价为1：8结论：BSA免疫家兔可获取效价较高的抗血清。【关键词】牛血清白蛋白(BSA)、效价、免疫Preparationandidentificationofrabbit

2、anti-BSAserumAbstract:ObjectiveTheantiseraofBSA(bovineserumalbumin)waspreparedandthetiterwasidentified.MethodsTheFreuncTsadjuvantwasgrindedwiththeBSA,paraffinoil,lanolinandbacilleCalmette-Guerin(BCG)・Thentherabbitwasimmunizedforfourtimesinamonth.Afteraweekcarotidb

3、loodlettinghadbeendonetogettheantiserafromtherabbit.Atlastthetiterwasidentifiedbydoubleimmunodiffusiontest.Thetiterofantiserumwas1:8indoubleimmunodiffusion.Conclusion:ThehighertiterofantiserumisobtainedbyimmunizingrabbitswithBSAKEYWORDSBovineserumalbumin(BSA)zTite

4、rJmmunity可溶性抗原(入血清、细胞浸出液、外毒素等)和相应抗体结合，在食量电解质存在下，经过一定时间，在二者比例适当时形成肉眼可见的沉淀物。可分环状沉淀实验，絮状沉淀实验，琼脂扩散实验（单向琼脂扩散实验。多向琼脂扩散实验），免疫电泳。由于沉淀反应抗原多系胶体溶液，沉淀物主要是由抗体蛋白所组成，制备可溶性抗体的物质有很多，但处理的方法繁琐或价格昂贵，并口效价不高。因此，寻找简单、快速、易操作的方法提供教学单位实际应用具有重要的现实意义。在免疫学的教学中，沉淀反应是必不可少的，而在本科学牛中此实验的操作又必列其中。目前

5、市场上生物制品缺乏某种可溶性抗原与可溶性抗体的配备供应，且价格昂贵。为了节约经费，使用方便，采用牛血清白蛋白（BSA）免疫家兔，以获取较高的BSA的抗血清，现将方法介绍如下。[1]1材料与方法1.1动物、试剂与仪器动物：家兔（7只），无免疫接种史，体重2.0—2.5kg,雌雄并用，由广东医学院动物室提供。试剂：生理盐水、石腊油和羊毛脂、卡介苗、碘酒、75%酒精、青霉素、15g/L琼脂巴比妥溶液、15克/L盐水琼脂（含抗体一兔抗牛血清白蛋白），实验仪器：无菌乳钵、试管、吸管、剪刀、银子、注射器、止血钳、载玻片、打孔器、微量加

6、样器、湿盒、三用电热恒温水箱（SHH.W21.600,天津泰特仪器厂）、离心机（AnkeTDL80-2B）电泳仪（DDY・7C型北京六一仪器厂）、电泳槽（DDC-3813型北京六一仪器厂）、牙签1.2动物免疫1.2.1免疫方案表1动物免疫方案免疫次数免疫时间免疫剂量免疫途径第一次2011.09.140.5ml家兔后脚足跖两侧第二次2011.09.210.5ml家兔后脚胭窝淋巴两侧第三次2011.09.281.0ml家兔背部皮内第四次2011.10.051.0ml家兔上肢或下肢肌肉两侧注：第四次免疫不加佐剂，只注射抗原。1.

7、2.2动物免疫和血清制备动物免疫1•制备抗原⑵将石腊油和羊毛脂(V/W二3:1)加热倾入乳钵中'待冷后加入卡介苗(10mg/ml),研磨。逐滴加人丙种球蛋白，直至完全磨成乳剂。2.动物免疫首次免疫时在家兔两侧后脚足跖各注射0.25ml弗氏完全佐剂；间隔1周进行第二次免疫，两侧后脚胭窝淋巴结处各注射0.25ml弗氏完全佐剂;1周后对家兔背部不同的五个点进行皮内多点免疫，每个点各注射0.2ml弗氏完全佐剂；第四周对家兔进行最后一次的免疫注射，注射部位是家兔两侧上肢的肌肉，每侧各注射0・5ml不加佐剂的抗原。每次注射抗原都应密切

8、观察兔子的反应状况，避免兔子在免疫过程中出现意外，造成中途死亡。3•血清制备（采用家兔颈动脉放血法）将家兔仰卧固定在解剖台上，让兔头下垂，使整个颈部伸直露出。沿正中线从下颌到胸骨柄约10cm,剪毛、消毒皮肤。沿正中线从下颌到胸骨柄切开皮肤，将皮肤和皮下组织剥离，并且在切口上下作横切开，然后将两侧皮外翻掀