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《产甘露聚糖酶解淀粉芽孢杆菌的筛选鉴定及产酶条件优化》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、产甘露聚糖酶解淀粉芽孑旬杆菌的筛选鉴定及产酶条件优化摘耍：从海底淤泥中筛选出一株产高活性B-廿露聚糖酶的菌株，经16SrDNA序列分析表明，该序列与解淀粉芽抱杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)的16SrDNA序列同源性为100%,将该菌株命名为BacillusamyloliquefaciensT27。对该菌株产酶条件进行了优化，以魔芋粉为碳源，酵母粉为氮源，装液量为50mL,250r/min.37°C培养24h,发酵液中粗酶活力能达到98.0U/mLo关键词：解淀粉芽抱杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)；#露聚糖；
2、甘露聚糖酶中图分类号:TQ925+.9文献标识码:A文章编号:0439-8114(2013)13-3105-04目前，在全球能源危机、粮食缺乏及环境保护越发重要的情况下，甘露聚糖酶在食品、造纸、印染、纺织等许多方面都具有重要作用［1-4］oB-甘露聚糖酶能特异性水解甘露糖类半纤维素，产生大量甘露寡糖和少量甘露糖［5］。该酶广泛存在于植物、动物、微牛物屮［6］,其中微生物来源的廿露聚糖酶具有易于大规模生产、来源稳定、生产成本低等特点，因此，寻找发掘能够产甘露聚糖酶的微生物资源备受人们关注。山于T业生产中要求所使用的甘露聚糖酶具有较强的稳定性、耐热性及耐酸碱等特性，
3、普通土壤环境下微生物产生的酶很难满足这一要求。海洋尤其深海环境特殊，包括了高压、低温、高盐、极端pH等，这一特殊环境中蕴藏着大量的稀有微生物资源。由于深海微生物产生的酶往往具有耐高温、耐高压和耐盐碱等特点[7],在一些较为苛刻的工业环境屮表现出极大的应用价值。因此，从海洋微生物中发掘新的酶资源受到越来越多的关注。本研究从海底淤泥中筛选到一株产甘露聚糖酶的海洋细菌，经分子生物学鉴定该菌株为解淀粉芽抱杆菌(Bac订lusamyloliquefaciens),并初步研究了该菌株的最佳产酶条件，为进一步利用该海洋菌株生产甘露聚糖酶奠定了基础。1材料与方法1.1材料1.1
4、.1样品与试剂海底淤泥样品取自厦门深海；TaqDNA聚合酶、PCR试剂、DNAMarker等均购自宝生物工程(大连)有限公司；槐豆胶、低熔点琼脂、蛋白月东和酵母粉购自英国Oxoid公司；UNIQ-10柱式DNA胶回收试剂盒购自上海生工生物工程技术服务有限公司；其他试剂均为分析纯。1.1.2培养基1)选择培养基。魔芋粉20.0g,酵母膏20.0g,NaCl6.0g,MgS04-7112()1.0g,KH2P041.0g,(NH4)2S042.0g,蒸憾水1000.0mL,pH7.5。2)种子培养基(LB培养基)。蛋白月东10.0g,NaCl10.0g,酵母膏5.0
5、g,蒸谓水1000.0mL,pH7.201.2方法1.2.1产甘露聚糖酶菌株的筛选与鉴定取约2g泥样加入到100mL蒸馆水中浸泡2h左右，取适量泥样悬液稀释，不同浓度梯度分别涂布在固体选择培养基上，37°C倒置培养2d后，用0.1%刚果红染色10min后弃去染液，用蒸憎水洗脱，选出透明圈直径与菌落直径比值大的菌株［8］。将筛选出的甘露聚糖酶高产菌株在LB固体培养基上划线培养，挑取单菌落于LB液体培养基中，28°C培养12〜16h,提取细菌基因组DNA。以基因组DNA为模板，利用细菌16SrDNA通用引物（fPl：5Z-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3
6、7,rP2：5’-ACGGCTACCTTGTTACGACTT-37）,PCR扩增所筛选出菌株的16SrDNA,PCR反应程序为：94°C预变性5min；94°C变性30s,60°C退火30s,72°C延伸100s,30个循环；72°C延伸7min0将测序（测序交由华大基因公司完成）后的序列通过与GenBank中登录的基因序列进行BLAST比对，确定筛选出的菌株的种属。1.2.2甘露聚糖酶的活力测定采用3,5-二硝基水杨酸（DNS）比色法测定还原糖含量［9］。取10pL甘露聚糖酶加入到90pL0.5%槐豆胶底物，55°C反应30min,然后加入100uLDNS终止
7、反应，沸水浴lOmin,冷却后加蒸憾水定容至1mL,再取200pL加至96孔板中，测定0D540nmo1.2.3产甘露聚糖酶菌株产酶条件的优化①培养时间对产酶的影响。250mL三角瓶装入50mL液体选择培养基，接种2%的种子培养液，置于37°C的摇床，转速为250r/min培养12、24、48h取样测定酶活。②培养温度对产酶的影响。250mL三角瓶装入50mL液体选择培养基，接种2%的种子培养液，置于28、37°C的摇床，转速为200r/min培养24h后取样测定酶活。③碳源对产酶的影响。250mL三角瓶装入50mL以魔芋粉和槐豆胶为不同碳源的液体选择培养基，分
8、别接种2%的种子培养液，
