棣棠丛枝病相关植原体的分子鉴定

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1、棣棠丛枝病相关植原体的分子鉴定常文程，李向东(山东农业大学植保学院植物病理系，山东泰安271018)摘要：用植原体16SrRNA基因和tuf基因通用引物，对表现丛枝症状的棣棠DNA进行巢式PCR扩增，分别得到了约1.2kb和800bp的特异性片段。序列分析表明：与棣棠丛枝相关植原体(KWB)的16S「RNA基因和tuf基因均与翠菊黄化植原体组(16SrI)D亚组泡桐丛枝株系一致率最高，为99.4%和99.5%O在系统进化树中，KWB也与16SrI-D亚组分离物聚类到一起。利用虚拟RFLP分析发现，KWB的16SrRNA基因Alul、HhaLMseLTaq教育部博上

2、学科点专项基金限制性酶切图谱与16SUD亚组植原体一致。以上结果表明，与棣棠丛枝病相关的植原体属于16SrI-D亚组。关键词：棣棠；植原体；16SrRNA基因；巢式PCR；tuf基因中图分类号：S432.42MolecularIdentiflcationofthePhytoplasmaAssociatedwithKerriaWitches，-BroomCHANGWencheng,LIXiangdong(DepratmentofPlantPathology,CollegeofPlantProtection,ShandongAgriculturalUniversity

3、,ShandongTai'an271018)Abstract:Byusinguniversalprimersforphytoplasmal16SrRNAandtufgenes,twospecificfragmentsofcal・2kband8(X)bpinlengthwereamplifiedwithnested-PCRfromtheDNAofkerriashowingwitches'-broomsymptom.Thefragmentsweresequencedandsubjectedtoidentityandphylogeneticanalysis・Theres

4、ultsindicatedthatthe16SrRNAandtufgeneofphytoplasmaisolateassociatedwithkerriawitches9-broom(KWB)sharedhighestidentitiesof99.4%and99.5%,respectively,withpaulowniawitches5-broomphytoplasma(PaWB)whichbelongstosubgroupDofasteryellowsgroup(16Srl-D).Inthephylogenetictreesconstmctcdwith16SrR

5、NAandtufgenes,KWBwasclusteredwithphytoplasmasof16SrI-D.The16SrRNAgeneofKWBhadidenticalpatternswitha16SrT-DphytoplasmaforAluI、HhaI、MseI>TaqIinthevirtualRFLPanalysis・Alltheseresultsindicatedthatthephytoplsamaassociatedwithkerriawitches-broombelongedtothesubgroupDofasteryellowsgroup(16Sr

6、I-D).Keywords:kerriawitches-broom;phytoplasma;16SrRNA;nested-PCR;tufgene植原体(CdMjdmsPhytoplasma)是一种没有细胞壁的原核微生物，主要由取食韧皮部的昆虫(如叶蝉、飞虱等)传播，也可由菟丝子寄牛和嫁接等途径传播，常常引起植株黄化、丛枝、花器变态、萎缩等症状。迄今为止，世界上报道的植物植原体病害有1()0()余种，仅我国就有10()多种，造成了巨大的损失。山于植原体尚不能进行体外培养，对其生物学特性了解较少。近年来，分子生物学的迅速发展极大地推动了植原体的鉴定和分类研究。植原体的

7、一些保守序列，如16SrRNA序列、核糖体蛋白基因(卩)、延伸因子基因(Ulf)、16S・23SrRNA间区序列(16S-23SrRNAspaceregion)、转运蛋白基因(S“Y)等，在植原体检测和鉴定中的应用越来越多；。2004年,国际比较菌原体学研究组(1RPCM)将植原体划分为17个组，24个候选种，至少40个亚组,并制订了相应的分类标准，认为16SrRNA基因核昔酸一致率低于97.5%的植原体就可确基金项目：教育部博士学科点专项科研基金(200804340006)作者简介：常文程(1987-),女，硕士，植原体的分子检测与鉴定通信联系人：李向东(196

8、9-)，男