典型实验教学案例简介

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1、典型实验教学案例简介案例x双波长分光光度法测定复方磺胺甲噁唑片中两组分含量药物的含量测定是药物质量控制的重要方面。紫外分光光度法以其准确度、灵敏度高，简便快速等特点，成为药物含量测定的重要方法。紫外法测定含量时，常选择被测组分的最大吸收波长最为测定波长，以提高检测的灵敏度。当用紫外法测定复方制剂多组分中一种组分的含量时，共存组分常常也会有吸收干扰，此时，消除干扰就成为准确测定的关键环节。双波长分光光度法作为计算分光光度法的一种，就是消除干扰、实现多组分含量同时测定的一种有效手段。本实验就以复方磺胺甲噁唑片为实验对象，通过双波长分光光度

2、法测定其两组分的含量，从而达到学习双波长法的原理和操作的目的。一、实验目的1．掌握双波长分光光度法的测定原理。2．熟悉双波长分光光度法在复方制剂分析中的应用。二、实验原理当吸收光谱重叠的a、b两组分共存时，若要消除a组分的干扰测定b组分，可在a组分的吸收光谱上选择两个吸收度相等的λ1和λ2，测定混合物的吸光度差值。然后根据ΔA值计算b的含量。SMZ在257nm波长处有最大吸收，TMP在此波长吸收最小并在304nm波长附近有一等吸收点，故选定257nm为SMZ的测定波长（图1），在304nm波长附近选择参比波长。TMP在239nm波长处

3、有较大吸收，此波长又是SMZ的最小吸收峰，并在295nm波长附近有一等吸收点，故选定239nm为测定波长（图2），并规定在此波长附近选择供测定的参比波长。由于参比波长对测定影响较大，故采用对照品溶液来确定。此波长可因仪器不同而异，测定时应仔细选择。图lSMZ紫外吸收图谱1.TMP(0.2μg/ml);2.SMZ(10.0μg/ml);3.SMZ+TMP;4.辅料图2TMP紫外吸收图谱1.TMP(5.0μg/ml);2.SMZ(25.0μg/ml);3.SMZ+TMP;4.辅料三、仪器与试剂1.主要仪器：紫外-可见分光光度计；100mL

4、容量瓶2.主要试剂：磺胺甲噁唑和甲氧苄啶对照品；0.4%氢氧化钠溶液；0.1mol/L盐酸溶液；氯化钾四、实验步骤1．磺胺甲噁唑的含量测定（1）平均片重测定：10片，精密称定。（2）供试品溶液配制：精密称取片粉(约50mgSMZ,10mgTMP)片剂乙醇溶解、定容过滤研磨100mL（3）对照品溶液配制乙醇100mL精称105℃干至恒重10mgTMP对照品50mgSMZ对照品乙醇定容定容对照液(1)对照液(2)2.00mlL0.4%NaOH100mL2.00mlL0.4%NaOH（3）取对照品溶液（2）的稀释液，以257nm为测定波长（

5、λ2），在304nm波长附近（每间隔0.5nm）选择等吸收点波长为参比波长（λ1），要求ΔA=Aλ2（2）－Aλ1（2）=0，再在λ2与λ1两波长处分别测定供试品溶液的稀释液与对照品溶液（1）的稀释液的吸收度，求出各自的吸收度差值（ΔA），计算，即得。2．甲氧苄啶的含量测定（1）稀释液配制：取上述供试品溶液与对照品溶液(1)、(2)各5.00mL，分别置于100mL容量瓶中，各加HCl-KCl溶液（0.1mol/LHCl75mL+6.9gKCl，加水至1000mL），稀释至刻度，摇匀。（2）参比波长选定：取对照液(1)的稀释液，以23

6、9nm为测定波长(λ2)，在295nm附近（每间隔0.2nm）选择等吸收点波长为参比波长(λ1)，使ΔA=Aλ2（1）－Aλ1（1）=0。（3）双波长测定：在λ2与λ1两波长处分别测定供试品溶液的稀释液与对照品溶液（2）的稀释液的吸收度，求出各自的吸收度差值（ΔA），计算，即得。3．结果计算式中ΔAu为供试液的ΔA值，ΔAs为对照液的ΔA值，Cs为对照液浓度（mg/mL），D为稀释倍数，W为取样量。五、注意事项1.测定之前应先检查仪器波长是否准确。2.仔细寻找等吸收点波长3.注意供试品溶液和对照品溶液的准确配制六、思考题1．双波长分光

7、光度法是如何消除干扰的？2．应用双波长分光光度法应如何选择测定波长和参比波长？