《我的创作改编》PPT课件

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1、基因工程郭玉柱1.1基因工程的基本操作工具1、概念：定向改造生物性状，解读2、原理：基因重组3、操作水平：DNA分子水平4、操作工具：（1）限制性核酸内切酶---分子手术刀1）来源：微生物（原核+真菌）2）作用特点：识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。3）结果：形成平末端或粘性末端（2）DNA连接酶—分子缝合针1）种类：E.coliDNA连接酶和T4DNA连接酶2）作用特点：使两个DNA分子片段之间形成磷酸二酯键，从而使之连接在一起。E.coliDN

2、A连接酶只连接粘性末端，T4DNA连接酶两种末端都能连，但连接平末端效率低。比较限制酶、DNA连接酶、DNA聚合酶、RNA聚合酶的异同点？相同点：都作用于磷酸二酯键不同点：1）限制酶切割DNA的磷酸二酯键2）DNA连接酶连接双链DNA片段形成磷酸二酯键。3）DNA聚合酶使单个脱氧核苷酸之间形成磷酸二酯键。4）RNA聚合酶使单个核糖核苷酸之间形成磷酸二酯键。（3）运载体---分子运输车1）种类：质粒、噬菌体衍生物、动植物病毒2）天然质粒不能作为运载体，需要加工修饰后才可以。3）质粒作为运载体满足的条件：1、有一个至多个限制酶切位

3、点，便于目的基因插入。2、能在宿主细胞中自我复制或整合到染色体DNA上，随染色体DNA同步复制。3、具有标记基因（如抗生素抗性基因、荧光标记基因），便于将含有目的基因的细胞筛选出来。4、大小适宜，对宿主细胞无伤害。1.2基因工程的基本操作程序基因工程基本操作的四个步骤1、目的基因的获取2、基因表达载体的构建3、将目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测与鉴定一、目的基因的获取(一)、目的基因主要是______________________编码蛋白质的结构基因请举出三个以上的例子（二）、获取目的基因的常用方法有哪些?1、从基因文库中

4、获取2、利用PCR技术扩增3、人工合成请阅读P9第一和二两段一、目的基因的获取（一）从基因文库中直接获取1.基因文库cDNA(互补DNA)：是由生物的某一特定器官或特定发育时期细胞内的mRNA经体外反转录后形成的互补DNA片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群就叫做这种生物的cDNA文库2)cDNA文库(cDNAlibrary)基因重组反转录酶mRNAcDNA一、目的基因的获取（一）从基因文库中直接获取按照外源DNA片段的来源：从特定组织提取的染色体基因组DNA---基因组DNA文库（总）mRNA反转录成的cDNA拷

5、贝----cDNA文库（部分）②基因文库的目的为了在不知目的基因序列的情况下，便于获得所需的目的基因。①基因文库的分类2.基因文库的构建方法①：直接分离法供体细胞中的DNA许多DNA片段运载体限制酶受体细胞产生特定性状导入外源DNA扩增目的基因分离(鸟枪法)一、目的基因的获取（一）从基因文库中直接获取多用于原核生物反转录法目的基因的信使RNA目的基因化学合成法肽链氨基酸序列信使RNA序列基因的核苷酸序列目的基因合成逆转录2.基因文库的构建方法一、目的基因的获取（一）从基因文库中直接获取②人工合成法（真核生物）推测推测单链DNA合成

6、①基因组文库的构建（2）.基因文库的构建方法通过对受体菌的培养而储存基因②cDNA文库的构建-----反转录法：以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。目的基因的mRNA单链DNA反转录酶DNA聚合酶双链DNA(目的基因)怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因呢?依据：目的基因的有关信息。如：根据基因的核苷酸序列基因的功能基因在染色体上的位置基因的转录产物mRNA基因翻译产物蛋白质等特性④从基因文库中得到目的基因的方法2、利用PCR技术扩增目的基因①概念：P

7、CR全称为_______________，是一项在生物____复制___________的核酸合成技术③条件：_______________________、_______________、___________、___________.等②原理：__________④方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循环的次数）⑤结果：聚合酶链式反应体外特定DNA片段DNA复制四种脱氧核苷酸一对引物DNA聚合酶指数2n使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增要有一段已知目的基因的核苷酸序列（前提条件）⑥过程：a、DNA变性（90℃

8、-95℃）：双链DNA模板在热作用下，_____断裂，形成___________b、退火（复性55℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部________。c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，合成与模板互补的_____