大黄鱼冷冻精子细胞结构损伤的研究【开题报告】

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1、毕业论文开题报告水产养殖大黄鱼冷冻精子细胞结构损伤的研究一、选题的背景与意义：鱼类精子的冷冻保存研究和探索，不仅对进一步分析生命的进程具有重要意义，而且对鱼类新品种的培育和养殖业的发展也具有促进作用。美国学者对哥伦比亚河某些濒危灭绝的鲑鱼和鲟鱼进行了精子冷冻保存，建立起了基因库；我国长江水产研究所建立了包括“四大家鱼”在内的淡水鱼类精子库；海洋鱼类，如黑鲷、真鲷、花鲈、牙鲆等的精子冷冻也取得了较大的进展。鱼类精子超低温冻存是鱼类种质资源保存，尤其是濒危、珍稀鱼类的种质资源保存的有效途径之一，同时也能为育种提供种质材料。大黄鱼是我国名贵的海产经济鱼类，是传统“四大海

2、产”之一，又是我国东南沿海重要的海水养殖品种。目前大黄鱼存在着天然资源严重衰退、养殖品种种质退化等问题，大黄鱼精子冷冻保存技术研究，对于大黄鱼种质资源的保存及育种具有现实意义。大黄鱼精子冷冻在国内外已见相关报道，对大黄鱼精子冷冻与解冻后活力、受精率等有过详细介绍，然而对于冷冻过程中对大黄鱼精子细胞的结构损伤的详细研究却较为少见，存在着各种各样的因素使得冻存精子受到不同损伤，从而影响冻精质量，进而影响冻精的的活力、受精率以及应用价值等。大黄鱼冷冻精子细胞结构损伤的研究有助于我们评价冻精质量，改进与优化冻存技术与工艺，提高冻存效果。二、研究的基本内容与拟解决的主要问题

3、：1研究的基本内容：（1）大黄鱼精子的超低温冻存（2）冷冻大黄鱼精子细胞结构损伤，包括细胞膜、核膜、线粒体、轴丝或鞭毛结构损伤等。2拟解决的主要问题：大黄鱼冷冻精子细胞结构损伤程度与抗冻剂浓度的相关性。三、研究的方法与技术路线：（一）研究方法1采精在生殖季节，挑选合适的雄鱼并取其精液。要求选择体长26—35cm，体重320—525，2龄以上性腺发育成熟的雄鱼供采精用。2抗冻液配制抗冻液由稀释液加抗冻剂配置而成。稀释液为Cortland溶液（7.25克NaCl，0.38克KCl，0.18克CaCl2，1.00克NaHCO3，0.23克MgSO4•7H2O，0.41克

4、NaH2PO4•2H2O，1.00克葡萄糖，用蒸馏水配置、定溶到1000毫升，调节pH值至7.00）。抗冻剂为二甲基亚砜（DMSO）或甘油（Gly）。按稀释液：抗冻剂=86.7：13.3的比例，配制抗冻液，放置于冰箱（4℃）保存备用。3冷冻保存将精液与抗冻液按1：3比例混匀，于4℃（置冰箱内）平衡10~15分钟。之后将精液-抗冻液混合物分装入体积为0.5毫升的麦细管中，每支盛约0.4毫升。将盛精麦细管平放于液氮面上几厘米处，几分钟后，将盛精麦细管投入液氮中，几分钟后，将液氮中的盛精细管转移到液氮罐中保存。4冻精的解冻可采用水浴快速解冻或自然解冻。5解冻后精子细胞结

5、构损伤的检测将解冻后的精子与鲜精用2.5%的戊二醛固定1~2h（4℃），然后用1%锇酸后固定1~2h（4℃），乙醇梯度浓度脱水，Spurr氏环氧树脂渗透、包埋，LKB-Ⅱ型超薄切片机切片，醋酸双氧铀染色40min后水洗，再用柠檬酸铅染色1min后，在JEM-1200EX型透射电镜下观察精子细胞结构损伤情况，并拍照。6结果分析根据实验结果分析冻精细胞结构损伤程度与抗冻剂浓度的相关性。(二)技术路线分析结果对解冻后精子细胞结构损伤进行检测按精液与抗冻剂1：3混匀冷冻保存分装好冷冻保存对冻精进行解冻配置抗冻液采集适合研究的大黄鱼精子五、主要参考文献：[1]汪小峰，樊廷俊

6、.鱼类精子冷冻保存研究进展[J].青岛：中国海洋大学生命学院海洋生物系.2003[2]CabntaE,Alvare&R.ANEL.Etal.Sublethal[J].Cryobiology.1998.37:245-253.[3]RitarAj，CamprtM.Spermsurvivalduringshort-termstorageandaftercrypreservationofsernenfromstripedtrumpeter[J].Theriogenology，2000，54（3）：362-364.[4]向祖琼,胡明广,曹文雷等.两种冷冻保护剂对精子冷冻保护

7、的效果比较[J]．上海第二医科大学学报,2005,3:318-319.[5]RasulZ,AhmadN,AnzarM.Changesinmotioncharacteristics,plasmamembraneintegrity,andacrosomemorphologyduringcryopreservationofbuffalospermatozoa[J].．Androl.,2001,22(2):278-283.[6]徐大康.细胞超低温的生物学问题[J]．西北民族学院学报，1996，17（2）：89-90.[7]苏天凤、艾红.鱼类精子活力及其超低温保存研究综述[

8、J]．上海