4789.11溶血性链球菌.ppt

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1、GB4789.11-2XXX食品安全国家标准食品微生物学检验溶血性链球菌检验——删除了以无菌生理盐水稀释样品的步骤；——增菌培养基以改良胰蛋白胨大豆肉汤代替了葡萄糖肉浸液肉汤和匹克氏肉汤；——分离培养基以哥伦比亚CNA血琼脂和哥伦比亚血琼脂代替了血琼脂平板；——完善了操作步骤；——在人血浆的基础上增加了兔血浆和绵羊血浆；——增加了规范性附录A。本标准与GB/T4789.5-2003相比主要变化本标准所代替的历次版本发布情况为：GB4789.11－1984、GB/T4789.11－1994、GB/T4789.11－2003。溶血性链球菌检验程序18h

2、~24h图1溶血性链球菌检验程序样品25g（或mL）+225mLmTSB划线接种哥伦比亚CNA血琼脂平板革兰氏染色镜检/触酶试验确定鉴定生化鉴定试剂盒或鉴定卡链激酶试验报告挑取可疑菌落，接种哥伦比亚血琼脂平板和TSB36℃±1℃18h～24h，厌氧培养36℃±1℃18h～24h36℃±1℃杆菌肽敏感试验操作步骤1样品处理及增菌按无菌操作称取检样25g（或mL），加入盛有225mLmTSB的均质袋中，用拍击式均质器均质1min～2min；或加入盛有225mLmTSB的均质杯中，以8000r/min～10000r/min均质1min～2min。若样品为液

3、态，振荡均匀即可。36℃±1℃培养18h～24h。2分离将增菌液划线接种于哥伦比亚CNA血琼脂平板，36℃±1℃厌氧培养18h～24h，观察菌落形态。溶血性链球菌在哥伦比亚CNA血琼脂平板上的典型菌落形态为灰白色、半透明、光滑、表面突起、圆形、边缘整齐，并产生β型溶血。3鉴定3.1分纯培养挑取可疑菌落分别接种哥伦比亚血琼脂平板和接种TSB增菌液，36℃±1℃培养18h～24h。3.2革兰氏染色镜检挑取可疑菌落染色镜检。β型溶血性链球菌为革兰氏染色阳性，球形或卵圆形，常排列成短链状。3.3触酶试验挑取可疑菌落于洁净的载玻片上，滴加适量3%过氧化氢溶液，

4、立即产生气泡者为阳性。β型溶血性链球菌触酶为阴性。3.4链激酶试验吸取草酸钾血浆0.2mL于0.8mL灭菌生理盐水中混匀，再加入经36℃±1℃培养18h～24h的可疑菌的TSB培养液0.5mL及0.25%氯化钙溶液0.25mL，振荡摇匀，置于36℃±1℃水浴中10min，血浆混合物自行凝固（凝固程度至试管倒置，内容物不流动）。继续36℃±1℃培养24h，凝固块重新完全溶解为阳性，不溶解为阴性。β型溶血性链球菌为阳性。3.5杆菌肽敏感试验取可疑菌纯培养物，在0.5mL灭菌生理盐水中混匀，用棉签沾取TSB增菌液均匀涂布于哥伦比亚血琼脂平板上，用灭菌镊子夹

5、取杆菌肽纸片，放于琼脂表面，36℃±1℃培养18h～24h，如出现抑菌圈即为敏感，同时用已知敏感菌株作为阳性对照。β型溶血性链球菌为杆菌肽敏感。3.6可选择使用生化鉴定试剂盒或生化鉴定卡对可疑菌落进行鉴定。结果与报告综合以上试验结果，报告每25g（mL）检样中检出或未检出β型溶血性链球菌