体内药物分析方法及方法的设计与评价.ppt

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1、体内药物分析BiopharmaceuticalAnalysis体内药物分析方法及方法的设计与评价生物样本经预处理后，选用适当方法进行测定。可供生物体液中药物及其代谢物含量测定的分析方法很多，归纳起来主要有三类：（一）光谱分析法（二）免疫分析法（三）色谱分析法除以上三类主要方法外，在生物药物分析中有时还使用同位素标记药物，它们主要应用于RIA、同位素逆稀释分析，或作为GC-MS分析的内标，以及在药物分离中作示踪应用等。此外，还有一些含抗生素类药物的生物样品，它们可用微生物方法测定，利用抗生素在琼脂

2、培养基内的扩散作用，比较样品与药物标准品两者对接种的试验菌产生的抑菌圈的大小，借以测定样品内抗生素药物的浓度。（一）光谱分析法光谱分析法包括比色测定、紫外分光光度法和荧光分光光度法。光谱法在体内药物分析中是应用较早的方法之一，根据陆明廉对我国1975～1984年间血药浓度测定方法的统计，应用光谱法占应用血药分析方法总数的三分之一。虽然近十多年来色谱法的飞速发展，使光谱法退出了体内药物分析应用方法的主角地位，但因其操作简便、快速，在体内药物分析中仍占有一定的地位。由于光谱法不具备分离功能，选择性较

3、差，因此对样品的预处理要求较高。选用专属的方法或试剂与之反应，测定衍生物的荧光或对光吸收强度，也可借助数学的方法消除干扰。1、比色法比色法灵敏度不高，通常只能测定出1ug/ml浓度以上的样品。但该法具有快速，简便，对仪器要求不高等特点。只要采用具有选择性的显色剂和反应条件，可不经分离提取等步骤，直接用于血药浓度监测。2、紫外分光光度法分光光度法的灵敏度较比色法高，适用于测定具有紫外吸收的药物，方法简单，仪器要求也不高。但用于测定含药浓度低的样品时，也受到一定的限制。如测定体液中药物浓度时，亦可能

4、受体液中内源性杂质的干扰和影响。因此，本法在体内药物分析中也受到灵敏度和专一性的限制。但采用一些光谱分析技术，如用差示分光光度法，导数分光光度法，双波长和三波长分光光度法等，可适当提高方法的灵敏度和选择性，也可消除杂质的干扰，因此，该法目前仍用于一些生物样品中的药物检测。3、荧光分光光度法荧光分光光度法的灵敏度比紫外-可见分光光度法的灵敏度高，最高可达到10-12g/mL，虽然有荧光的物质数量不多，但体内许多重要的生化物质、药物及其代谢物或致癌物都有荧光现象。由于荧光衍生物试剂的使用，进一步扩大

5、了荧光分光光度法的应用，因此该法在体内药物分析和药物动力学研究中得到广泛的应用。（二）免疫分析法免疫分析主要指放射免疫、酶免疫、荧光免疫分析等。该法的原理是利用抗原-抗体特异反应来测定体内药物的含量。该法具有灵敏度高、专一性强、操作简便、快速等优点，是临床治疗药浓监测和生化检验的常用方法，但需要一定的试剂盒和仪器。(三)色谱分析法色谱方法包括HPLC、GC和TLC等方法。色谱法在我国体内药物分析中的应用始于20世纪80年代，由于色谱法具有分离分析功能，具有高的专属性和灵敏度，并能同时分离分析结构

6、相似的药物和代谢物等优点，使得其近20年来发展迅速，尤其是HPLC法，己在体内药物分析领域中确立了主导地位，常用作体内药物分析中评价其他方法的参比方法。近年手性色谱技术、毛细管电泳技术、色谱与光谱联用技术、色谱与免疫联用技术等的建立与发展，更为色谱技术在体内药物分析中的应用增添了无量的前景。1、HPLC法HPLC法在体内药物分析中的应用已大大超过其他分析方法，成为体内药物分析中应用最广泛的技术之一。与GC法相比，它具有以下优点：(1)适用范围广，可在室温下进行检测。对于挥发性低的，热稳定性差的，

7、分子量大的以及离子型化合物等均可测定。(2)样品预处理简单，可不经萃取和衍生化处理直接测定极性大的水溶性药物，特别适合生物样品的测定；(3)分离效率高，流动相选择范围广，仪器自动化程度高。(4)检测器多是针对整分子的光谱特征进行检测的，专一性较高。检测方法多采用非破坏性的。流出组分可回收，可用于样品的制备。2、GC法GC法是最先兴起的具有分离和分析两种功能的测定技术，在药物分析和体内药物分析中曾得到较广泛的应用。由于HPLC法的发展，尤其是RP-HPLC(反相-高效液相色谱法）的广泛应用，使GC

8、法的应用相对减少。其原因是GC法本身具有一些缺点，应用时常受被测组分的挥发性和热稳定性等方面的限制。用GC测定药物时一般需要在120℃以上柱温条件下进行，因此不适合用于遇热不稳定和极性大或挥发性差的药物，不适合用于生物样品的测定。因而影响该法在体内药物分析中的广泛应用。（四）毛细管电泳法毛细管电泳法(CE)，又称高效毛细管电泳法(HPCE)，是20世纪末发展起来的一种高效、快速的分析技术。HPCE是以高电压电场为驱动力，以毛细管为分离通道，依据样品各组分之间淌度和分配系数的不同而实现分离的一类液