血清谷丙转氨酶测定.ppt

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1、血清谷丙转氨酶活性测定——比色分析法实验提纲实验目的1酶活性测定原理与方法2比色分析法原理与公式计算3722分光光度计操作方法与注意事项4思考题51实验目的1234掌握血清谷丙转氨酶活性测定的原理熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的方法熟悉比色分析法了解722分光光度计的使用方法2酶活性测定原理与方法酶活性测定原理＋2,4－二硝基苯肼(黄色)丙酮酸二硝基苯腙(红棕色)NaOHα-酮戊二酸丙氨酸谷氨酸丙酮酸＋GPT丙酮酸酶活性测定方法2酶活性测定原理与方法1试管号标准管标准空白管测定管测定空白管丙酮酸标准液（ml）(1ml=100μg)0.1－－－新鲜血清（ml）－－0.10.1底物液（37℃）（ml）

2、0.50.50.5－0.1mol/L磷酸盐缓冲液（ml）(pH=7.4)－0.1－－此前三管置于37℃保温30分钟2，4-二硝基苯肼(ml）0.50.50.50.5底物液（ml）－－－0.5充分混合，置于37℃保温20分钟0.4mol/LNaOH（ml）555523酶活性测定方法2酶活性测定原理与方法标准管标准空白管测定管测定空白管颜色深浅不一酶活性测定方法2酶活性测定原理与方法试管号标准管标准空白管测定管测定空白管丙酮酸标准液（ml）(1ml=100μg)0.1－－－新鲜血清（ml）－－0.10.1底物液（37℃）（ml）0.50.50.5－0.1mol/L磷酸盐缓冲液（ml）(pH=7.4

3、)－0.1－－此前三管置于37℃保温30分钟2，4-二硝基苯肼(ml）0.50.50.50.5底物液（ml）－－－0.5充分混合，置于37℃保温20分钟0.4mol/LNaOH（ml）5555酶活性测定方法2酶活性测定原理与方法标准管标准空白管测定管测定空白管如何排除干扰?真正丙酮酸定量?颜色深浅不一:还有其他酮酸的影响3比色分析法原理与公式计算比色分析法原理定义——通过比较有色物质溶液颜色的深浅，测知该物质浓度的方法。12原理——Lambert－Beer定律3比色分析法原理与公式计算比色分析法公式推导2A标/A测=C标/C测数学表达式——A=K×C×L溶液吸光度溶液吸光系数溶液浓度液层厚度1

4、公式推导本实验公式计算3比色分析法原理与公式计算A标准－A标准空白0.1ml血清所产生的丙酮酸μg数＝A测定－A测定空白C标准×谷丙转氨酶活性单位的定义：1ml血清于37℃与底物作用30分钟，产生2.5μg丙酮酸为1个GPT活性单位。活力单位/ml＝0.1ml血清所产生的丙酮酸μg数×102.512上述各管静置10分钟后，使用722分光光度计，在520nm处，以蒸馏水校正零点，测定各管相应吸光度值。标准管标准空白管测定管测定空白管酶活性测定方法2酶活性测定原理与方法4722分光光度计使用方法及注意事项使用方法接通电源前，检查仪器部件是否完好，工作电压是否正常。将比色杯内放好空白液（蒸馏水）、标

5、准液、标准空白液、测定液、测定空白液，置于比色池中（由下向上的顺序放置）。（见图）1234盖上暗箱盖，选择仪器自动校正空白液“A”=0，并由下向上的顺序读取各管“A”（即A标准、A标空、A测定、A测空）。（见图）start接通电源打开暗箱盖，进入光度测量界面。选择测定的波长（520nm）。（见图）GOTOλ4722分光光度计使用方法及注意事项使用方法4722分光光度计使用方法及注意事项使用方法4722分光光度计使用方法及注意事项使用方法注意事项4722分光光度计使用方法及注意事项手持比色杯磨砂面，比色杯光面对准光路。比色杯内液体体积占总体积2/3，比色杯外壁不可有液体，则需擦镜纸沾去。与比色杯

6、由下向上所放位置对应，仪器所报数据顺序则由1-5。1235思考题123实验操作中第一次37℃保温30分钟和第二次37℃保温20分钟，各有什么意义？为什么实验中设立标准空白管和测定空白管？空白管意义是什么？在理解本实验设计的基础上，设计一个血清谷丙转氨酶的实验方案。谢谢大家！