植物脱毒和快速繁殖技术.ppt

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1、第七章植物脱毒和快速繁殖技术组员：贺秀娟叶研春韩婷花韩秀丽白秉元马延梅第一节植物脱毒的原理一热处理脱毒1.高温短时处理法这种方法是利用病毒与植物耐热能力的不同，将木苗、接穗或种子等繁殖材料在一定的高温下处理一段时间，将其体内的病原杀死或钝化，失去侵染能力，而保持其本身的生活力，从而达到脱毒的目的。该法尤其适用于类菌原体、类细菌的脱毒，而对于类病毒的脱毒效果较差，因为类病毒通常有较强的热稳定性。这种处理方法与1921年首先用于甘蔗的脱毒，国内用这种方法处理柑橘，可脱除柑橘材料内的黄龙病类细菌。2低热长时处理法低热长时处理一般不能使整株植株脱毒，而只能使个别器官脱毒，大多是使在热处理过

2、程中长出的茎尖无病毒。因此，处理的最后步骤是要取新产生的茎尖嫁接到无毒实生碊木上或将新产生的茎尖进行扦插繁殖，以获得脱病毒植株。但对不同病毒及不同植物种类的脱毒率差异很大。二、组织培养脱毒1.茎尖培养脱毒Morel等（1952）首先从感染有花叶病毒的大丽花上分离出茎尖分生组织（0.25mm）培养得到植株，嫁接在大丽花实生砧木上检验未无病毒植株。从此，茎尖培养就成为脱去病毒的一个有效途径，并相继在马铃薯、菊花、兰花等茎尖培养脱毒的研究中获得成功。茎尖培养脱毒可脱除多种病毒、类病毒、类菌原体和类立克次体，很多不能通过热处理脱除的病毒可以通过茎尖培养而脱掉。茎尖培养脱毒直接从茎尖生长获得植株

3、，很少有变异，能很好地保持品种的特性。茎尖培养之所以能脱除病毒，是因为感染病毒的植株的幼嫩及未成熟的组织和器官中病毒含量较低，生长点（约0.1~1.5mm区域）则几乎不含病毒或含病毒很少。植物茎尖等分生组织中不含或很少含有病毒的原因：（1）植物茎尖分生组织中胞间连丝发育不完全或太细，使病毒在细胞之间的扩散作用受到抑制。（2）病毒复制、运输速度与茎尖细胞生长速度不同，病毒向上运输速度慢，而而分生组织细胞繁殖快，结果使茎尖区域部分的细胞没有病毒。（3）植物生长点细胞中缺少病毒增值的感受点，因而复制过程不能进行。（4）茎尖等分生组织中存在抑制、钝化病毒的物质（5）茎尖或其他组织在培养过程中病

4、毒被钝化或抑制2.茎尖微芽嫁接脱毒茎尖微芽嫁接脱毒是组织培养与嫁接相结合，用以获得无病毒苗木的一种新技术。他将0.1~0.3mm的茎尖作为接穗，嫁接到由试管中培养出来的无毒实生砧木上，继而进行试管培养，愈合成为完整植株的脱毒方法。它可消除用热处理不能除去的一些病毒，如衰退病毒、木质陷孔病毒、黄脉病毒等。茎尖微芽嫁接脱毒可以解决一些果树茎尖培养成苗难，特别是生根困难的问题。有些果树种类或品种，如格瑞弗斯苹果通过茎尖组织培养，可以获得无病毒新梢，但不能生根，只有通过茎尖微芽嫁接脱毒才能获得完整植株。3.其他外植体的组织培养方法脱毒除茎尖培养外，还可从花粉、花药、胚、胚珠及珠心等组织培养获得

5、无病毒的植株。这些器官或组织也是植株中含病毒较少的部位，但不同病毒或不同寄主植物使他们带毒或不带毒的情况各不相同，采用这些器官脱毒时，首先应弄清楚其带毒情况。关于一些植物种胚中不携带病毒的原因有两种观点：一种观点认为病毒不能进入胚中，植物子房中胚与其他母体细胞之间缺少维管束组织和胞间连丝的关系；另一种是认为病毒能进入胚，但进入后为寄主所消灭。有这样一种现象，种子在未成熟时带有病毒，到成熟时，病毒就消失了，这就说明，即使没有胞间连丝，病毒还可以通过其他途径进入胚中，但是有些植物的种子中存在着一种抑制病毒的物质。此外，还有人认为是有些种胚中缺少病毒增值所需要的重要物质。而使病毒不能复制对于

6、一些果树植物要获得与亲本一致的无性系无病材料，可以从胚囊败育的子房中在胚囊败育之前获取胚珠或珠心组织进行培养。花药或花粉培养也可以作为一种脱毒方法，这种方法可结合单倍体育种进行，用花药培养进行草莓脱毒，脱毒率可达100%。花药培养获得的无毒材料多为高产优质的类型。植物的感染病组织中不是所有细胞都含有病毒。因此，也有人从感病植株分离原生质体、愈伤细胞或其他细胞，继而培养获得植株，然后通过鉴定病毒从中选择无病的材料三、其他脱毒方法1.合并使用热处理、茎尖培养或微芽嫁接脱毒这种脱毒方法是从经热处理后的新梢顶端切取一段嫩梢，再嫁接到事先准备好的实生砧木上，如果用徒手嫁接，枝梢的长度至少

7、要达到1.0~1.5cm方可。若要使这样长的嫩梢无病毒，对于苹果至少须热处理3~4周，而一些耐热性弱的品种，在热处理期间，因高温伤害，大部分枯死，或嫁接后成活率很低。用茎尖培养脱毒，需要用很小的茎尖才能脱除病毒，通常采用的茎尖大小为0.1~0.2mm，因茎尖太小往往成活率很低。对于茎尖嫁接也有类似情况，茎尖太小往往不能成活。因此，茎尖培养、茎尖嫁接不仅很难操作，而且一些病毒不能脱去，如单纯的茎尖嫁接不能脱除柑橘碎叶病毒。合并使用热处理、茎尖培养