基于大豆过氧化物酶免疫传感的心肌疾病标志物检测.pdf

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1、学校代码：10286分类号：O65密级：公开UDC：543学号：152316基于大豆过氧化物酶免疫传感的心肌疾病标志物检测研究生姓名：唐敏导师姓名：刘松琴教授申请学位类别理学硕士学位授予单位东南大学一级学科名称化学论文答辩日期2018年6月4日二级学科名称分析化学学位授予日期2018年月日答辩委员会主席丁收年评阅人王坤丁收年2018年6月6日硕士学位论文基于大豆过氧化物酶免疫传感的心肌疾病标志物检测专业名称：分析化学研究生姓名：唐敏导师姓名：刘松琴教授DETECTIONOFCARDIACDISEASEMA

2、RKERSBASEDONSOYBEANPEROXIDASEIMMUNOSENSINGAThesisSubmittedtoSoutheastUniversityFortheAcademicDegreeofMasterofScienceBYTangMinSupervisedbyLiuSongqinSchoolofChemistryandChemicalEngineeringSoutheastUniversityApril2018东南大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工

3、作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：日期：东南大学学位论文使用授权声明东南大学、中国科学技术信息研究所（含万方数据）、国家图书馆、《中国学术期刊（光盘版）》电子杂志社有限公司有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内

4、容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布（包括以电子信息形式刊登）论文的全部内容或中、英文摘要等部分内容。论文的公布（包括以电子信息形式刊登）授权东南大学研究生院办理。研究生签名：导师签名：日期：摘要摘要心血管疾病是威胁人类健康的“头号杀手”，急性心肌梗塞（AMI）是主要的心血管疾病。AMI发病突然，急性期死亡率高，约为30%，在AMI的常用诊断方式中，对其生化标志物的检测异常重要。心肌肌钙蛋白I（cTnI）具有高度的心肌特异性，因而被视为诊断AMI的“金标准”，

5、cTnI的灵敏准确检测对于AMI疾病的早期诊断治疗具有重大现实意义。同时，肌酸激酶（CK-MB）是心肌酶谱中具有较高心肌特异性的酶，肌红蛋白(Myo)由于其分子量较小，在AMI发病初期，血液中Myo的浓度迅速增加，因而其对于AMI的诊断具有很高的灵敏度。将血清中cTnI、CK-MB和Myo的检测集成于同一芯片，实现三种心肌疾病血清学标志物的同时检测，可为快速、灵敏、准确AMI的诊断与治疗提供依据和保障。基于此，本论文构建了基于大豆过氧化物酶（SBP）催化鲁米诺（luminol）-双氧水（H2O2）体系检测

6、血清中AMI生化标志物的方法，主要包括以下两部分工作：（1）基于聚乙烯亚胺（PEI）良好的导电性、生物成膜性、以及具有还原性等特性制备了聚乙烯亚胺功能化的还原氧化石墨烯（PEI-RGO），并通过酰胺化反应在其表面固定捕获抗体（Ab1），利用抗原抗体间的特异性识别作用将cTnI抗原（Ag）和大豆过氧化物酶标记的检测抗体（SBP-Ab2）依次固定以形成夹心免疫复合物。在过氧化氢（H2O2）的存在下，利用SBP催化氧化luminol产生的电化学发光信号实现对cTnI的检测。检测的线性范围为5-30000pg/m

7、L，检测限达到3.3pg/mL，构建的免疫传感器对cTnI的检测具有良好的选择性和重现性，同时，用于实际血浆样品的检测时，显示了较好的准确性，这为cTnI的检测提供了选择。（2）构建了一种生物免疫芯片实现对cTnI、CK-MB、Myo三种生化标志物的同时检测。将三种待测抗原对应的捕获抗体固定于硝酸纤维素膜表面，之后依次固定待测抗原和三种对应的检测抗体Ab2-SiO2-SBP形成双抗体夹心免疫结构。在增强剂的存在下，SBP催化luminol-H2O2产生很强的化学发光信号，采集对应位置的发光信号值从而对三种

8、标志物进行同时检测。实验结果表明，免疫传感芯片对cTnI的线性检测范围为0.02-80ng/mL（检测限为0.006ng/mL），CK-MB的线性检测范围为0.2-120ng/mL（检测限为0.067ng/mL），Myo的线性检测范围为0.3-480ng/mL（检测限为0.1ng/mL）。关键词：电化学发光，化学发光，夹心免疫，大豆过氧化物酶，鲁米诺IAbstractAbstractCardiovasculardiseasei