拟南芥低钙诱导cDNA文库的构建.pdf

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1、北方农业学报2016，４4（5）：8～14JOURNALOFNORTHERNAGRICULTUREdoi:10.3969/j.issn.2096-1197.2016.05.02拟南芥低钙诱导cDNA文库的构建高天１，铁英2，王妍1，祁智1（1.内蒙古大学生命科学学院，内蒙古呼和浩特010021；2.内蒙古和盛生态科技研究院有限公司，内蒙古呼和浩特010021）摘要：钙是植物生长发育所必需的营养元素，Ca2+作为细胞内信使参与多种信号途径。为了进一步研究Ca2+在植物体内的调控机制，以生态型拟南芥为

2、材料，提取了拟南芥经低钙诱导处理的幼苗总RNA，使用SMARTcDNA合成技术合成含有与pGADT7-Rec载体末端同源的cDNA，然后将cDNA和pGADT7-Rec共转入酵母菌株Y187中，通过同源重组构建了拟南芥低钙诱导的cDNA文库。经检测，文库滴度为3×109cfu/mL，文库插入片段在200~2700bp，平均插入片段大小为760bp，阳性克隆率为79.2%。结果表明此cDNA文库质量良好，适用于互作蛋白的筛选。关键词：拟南芥；Ca2+；cDNA文库中图分类号：Q943.2文献标识码：

3、A文章编号：2096-1197（2016）０5－０００8－０72+ConstructionofcDNAlibraryinducedbylowCainArabidopsisthalianaGAOTian1，ＴIEＹｉｎｇ2，WANGYan1，QIZhi1（１.CollegeofLifeScience，InnerMongoliaUniversity，Hohhot010021，China；2.InnerMongoliaHeshengEcologicalScienceandTechnologyResear

4、chInstituteCompanyLimited，Hohhot010021，China）2+Abstract：Calciumisanindispensablenutrientelementforplantgrowthanddevelopment.Thecalciumion（Ca）isaversatileintracellularmessengerthatisinvolvedinnumeroussignallingpathways.Inordertoexploretheregulatorymech

5、anismofcalciumhomeostasisinplants，weisolatedtotalRNAfromArabidopsisthalianaseedlingsinducedwithlowCa2+.First，SMARTcDNAsynthesistechnologywasusedtocreateacDNApoolwithendsequenceshomologoustothepreyvectorpGADT7-Rec.Thenweco-transformedY187YeastStrainand

6、allowedtheyeasttoperformarecombinationstepbetweenthelinearpreyvectorandthecDNA.ThecDNAlibraryinducedbylowCa2+inArabidopsisthalianawasthusconstructed.Thelibrarycapacityisabout3×109cfu/mL.Thelengthoftheinsertionfragmentsrangesfrom200to2700bpwithanaverag

7、elengthof760bpandthepositiveclonerateis79.2%.ThesedatasuggestthatthecDNAlibraryisinhighqualityandsuitableforscreeningtheinteractingproteinsinArabidopsisthaliana.Keywords2+；cDNAlibrary：Arabidopsisthaliana；Ca拟南芥为十字花科植物，广泛分布于欧亚大陆拟南芥植株较小，在有限的空间内可大量种植；结实和非

8、洲西北部。拟南芥作为一种模式植物，具有其他多（每株植物可产生数千粒种子）；遗传转化操作简植物无法替代的优点：生长周期短（从发芽到开花单，易获得突变体；自花授粉植物，基因高度纯合；基28～42d）；基因组小（约为12500万碱基对，包含约于上述优点，拟南芥成为植物分子遗传学研究的模2.6万个基因，编码约2.5万种蛋白质），基因组仅由式材料，被科学家誉为“植物中的果蝇”，广泛用于植物生命奥秘的研究探索[1-3]5对染色体组成，是目前已知植物基因组中最小的；。收稿日期：2016-08-1