急性心肌梗死患者内脏素mrna基因表达及临床相关性的研究.doc

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1、急性心肌梗死患者内脏素mRNA基因表达及临床相关性的研究【摘要】目的：探讨急性心肌梗死患者内脏素基因在脂肪组织中表达情况，以及内脏素mRNA基因表达与患者临床相关性研究，为急性心肌梗死患者防治提供新的方法。方法：根据临床诊断标准将80例急性心肌梗死患者作为急性心肌梗死组，将100例正常人作为对照组。用RT-PCR方法检测内脏素mRNA的水平和基因的表达水平，并同时收集比较两组的临床检查数据指标。结果:急性心肌梗死患者组的血清内脏素浓度及脂肪组织中的内脏素mRNA基因表达均高于对照组（P【关键词】急性心肌梗死;内脏素；mRNA基因表达；脂肪组织【Abstract]Objective：

2、ToinvestigatetheexpressionofmRNAgeneintheadiposetissueofpatientswithacutemyocardialinfarction,andtoprovideanewmethodforthepreventionandtreatmentofpatientswithacutemyocardialinfarction.Method:Accordingtothecriteriaofclinicaldiagnosis,80patientswithacutemyocardialinfarctionwereenrolledasacutemyo

3、cardialinfarctiongroup,and100normalpeoplewereservedascontrolgroup.RT-PCRmethodwasusedtodetectthelevelofmRNAandtheexpressionlevelofgene,andtheclinicaldataofthetwogroupswerecollectedandcompared.Result：TheplasmavisfatinlevelandthequantitaitiveofvisfatinmRNAexpressionadiposetissuesofacutemyocardia

4、linfarctionofpatientsweresignificantlyhigherthanthoseincontrolgroup(P1资料与方法1.1一般资料选取2013年1月-2015年4月在南方医科大学南海医院腹外科100例胆石症患者作为对照组，排除一切临床心脑血管病患者；另选取2013年12月-2015年4月在广东省人民医院及南方医科大学南海医院急性心肌梗死患者80例作为急性心肌梗死组，患者均经心肌酶三项、肌钙蛋白、心电图、动态心电图及冠状动脉造影的结果确诊。排除恶性肿瘤、血液病、各种急慢性炎症期、各种急慢性心、脑血管病及其他相关的内分泌疾病。1.2方法1.2.1标本留

5、取急性心肌梗死的患者急诊抽取静脉血5mL,胆石症患者在术晨抽取空腹静脉血5mL,在医院实验室高速离心机中分离研究对象的血清，分离出来的血清标本立即送检验科予FINS、血糖、FBG、甘油三酯、胆固醇、游离脂肪酸等基本临床指标测定,另一管保存在南方医科大学南海医院-80°C专用试验冰箱内，并分批次送广东省人民医院分子生物试验室测内脏素mRNA的水平。急性心肌梗死患者在股动脉穿刺时取腹部脂肪或冠脉搭桥时取脂肪组织液氮迅速冻存，对照组胆石症患者手术时取皮下脂肪或大网膜脂肪液氮迅速冻存，用于研究内脏素RNA提取。1.2.2RNA提取用通用的TRIZOL法提取，在实验室用紫外发光光度计测定内脏

6、素RNA浓度和含量。1.2.3内脏素基因的mRNA表达水平检测步骤（1）研究对象内脏素基因引物的设计与合成：研究采用半定量RT-PCR方法扩增目的基因，实验对照内参照肌动蛋白基因（B-actin）。然后在PUBMED±以Genebank基因库上发布的人内脏素基因与B-actin基因的作为序列，利用国际通用的引物软件（Primer-5）设计引物。笔者得出的3-actin的两条基因扩增引物基因序列分别为5'-CAGCACTGTGTTGGCGTACA-3'及5'-GCTATCCAGGCTGTGCTATC-3?,扩增后基因产物的长度为495bpo而另一个Visfatin基因的扩增引物为5-

7、TTACATACACACAACACACACCC-3',5-GCCGATTATCTTTACATAGGACG-3',基因扩增后产物为片断228bp基因片段。(2)第二阶段，研究对象目的基因cDNA的合成：采用PROMEGA公司生产的逆转录试剂盒将特定目的的RNA逆转录合成，形成研究对象目的基因的cDNAo(3)第三阶段，采用聚合酶链反应(PCR)合成所需要的研究需要的第二条链,聚合酶链的反应体系物质如下:dNTP2uL(2.5mmol/L)及-actin基因上、下游引物各