动物组织中盐酸克伦特罗的残留测定—胶体金免疫层析法.pdf

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1、ICS备案号：DB34安徽省地方标准DB34/T824-2020动物组织中盐酸克伦特罗的残留测定—胶体金免疫层析法DeterminationofclenbuterrolresidueinanimaltissuesColloidalgoldimmunochromatographicmethod（征求意见稿）2020-XX-01发布2020-XX-01实施实施安徽省市场监督管理局发布DB34/T824—2008前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准代替DB/T824-2008《动物组织中盐酸克伦特罗的残留测定—胶体金

2、免疫层析法》，除编辑性修改外主要技术变化如下：——修改了范围（见1）；——修改了规范性引用文件（见2）；——修改了检测步骤（见5）；——修改了结果判断（见6）；——修改了结果确认（见7）。本标准由安徽省兽药饲料监察所提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所。本标准起草人：许世富、。本标准2008年8月发布，本次为第一次修订。IIDB34/T824—2008动物组织中盐酸克伦特罗的残留测定—胶体金免疫层析法1范围本标准规定了动物肌肉、肝脏、肾脏中盐酸克伦特罗残留测定的胶体金免疫层析法。本标准适用

3、于动物肌肉、肝脏、肾脏中盐酸克伦特罗残留的快速检测。本标准检测限为3µg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理本试验采用胶体金竞争抑制法。将氯金酸用枸橼酸钠还原法制成一定直径的金溶胶颗粒，标记抗体。硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细管作用，将样本滴加在胶体金检测条样品垫一端，使液体慢慢向吸水纸另一端渗移。在样本移动的过程中，会发生相应的抗原抗体

4、反应，并通过免疫金的颜色而显示出来。样本中的盐酸克伦特罗在流动的过程中与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体和硝酸纤维素（NC）膜检测线上的盐酸克伦特罗人工抗原的结合，使检测线不显颜色，结果为阳性；反之，检测线显紫红色，结果为阴性。4试剂和材料4.1除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的二级水。注：不同检测卡制造商间的产品组成和操作会有细微的差别，应严格按说明书要求规范操作。4.2胶体金免疫层析快速检测卡组成4.2.1盐酸克伦特罗抗体单克隆抗体。4.2.2胶体金。胶体金溶液采用氯金酸还原法制备，应为带负

5、电的紫红色疏水胶体金溶液，金颗粒大小应在30nm～60nm之间。4.2.3硝酸纤维素膜。硝酸纤维素膜表面应平整、光滑、白净，没有划痕、凹印、小孔、水迹、橘皮状或其他肉眼能见的瑕疵，无灰尘、油渍或其他杂物。硝酸纤维素膜宽度为（25.4±0.5）mm，长度在（100±2）mm，厚度在（185±19）μm，毛细流速度为（180±45）s/40mm。4.2.4聚酯纤维膜。聚酯纤维膜表面形状应为基本均匀的矩形，无明显歪斜现象。色泽好，白色，表面洁净，均匀度好，无破损，无起皱，无污点，无色斑，无霉点，无异味，无杂质及灰尘。聚酯纤维膜2重量在（98

6、.3±10.0）g/m，厚度在（0.42±0.07）mm，长度为（305.0±2.5）mm，宽度为（254.0±2.5）mm。4.2.5吸水纸。4.2.6底板。4.2.7塑料盒。4.2.8塑料吸管。4.2.9提取液。4.3电子天平：感量分别为0.01mg和1mg。1DB34/T824—20084.4离心机：≥3000rpm。4.5离心管：3mL。4.6阴性对照：取不含盐酸克伦特罗的空白样品依法制备。4.7阳性对照：取盐酸克伦特罗标准工作液用水稀释为10µg/L。4.8水浴锅。5实验步骤5.1样品制备取新鲜或解冻后的供试样品适量（约1g

7、），剪碎，装入3mL离心管中，盖紧管盖，100℃加热5min，取出，放冷，必要时3000rpm离心5min，取上清组织渗出液100μL，加入100μL金标样品稀释液，混匀，备用。5.2溶液制备5.2.1盐酸克伦特罗储备液准确称取盐酸克伦特罗对照品适量，用甲醇溶解后稀释成1mg/mL的储备液，－18℃冰箱中贮存备用，有效期3个月。5.2.2盐酸克伦特罗标准工作液取盐酸克伦特罗储备液，用水稀释至100μg/L，4℃中贮存备用，有效期1个月。5.3样品检测5.3.1从包装袋中取出盐酸克伦特罗胶体金免疫层析快速检测卡，置于平整的台面上，检测卡

8、应即开即用。5.3.2用塑料吸管（4.2.8）垂直滴加2滴（约60μL～80μL）无气泡上清液（5.1）于加样孔（S）内，每批需做阴性对照和阳性对照各一个，加样方法同待测样品。5.3.3加样后5min时观察结果。6结果判