液相色谱基础.ppt

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1、液相色谱基础知识一、色谱起源石油醚碳酸钙颗粒色素玻璃柱二、定义色谱法：利用组分在两相间分配系数不同而进行分离的技术移动相：携带样品流过整个系统的流体固定相：静止不动的一相，色谱柱固定液液相色谱流程图溶剂输液泵进样器柱温箱检测器数据处理流动相流动相选择注意事项：纯度：采用“HPLC”级溶剂避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂对试样有适宜的溶解度溶剂粘度要小与检测器相匹配反相液相色谱流动相极性大于固定相极性样品的保留顺序是非极性组分保留值大，极性组分先流出。正相液相色谱流动相极性小于固定相极性溶剂前处理过滤

2、：0.45um或更小孔径滤膜目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其是使用无机盐配制的缓冲液。溶剂前处理脱气目的：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡气泡对测定的影响：1）柱流量不准2）检测器基线波动脱气注意点：1）每天脱气(无在线脱气器时）2）混合溶剂脱气时间不能过长返回输液泵送液方式：恒流控制恒压控制VP系列输液泵：LC-10ADvp泵和LC-10ATvp泵D泵：并联微体积往复式泵T泵：串联式往复泵岛津VP系列输液泵目的单元流速范围特性和应用分析LC-10ADVP0.001-9.999超低脉动，适

3、于半微量LC和LC-MSLC-10ATVP0.001-9.999非凡的耐用性，适于常量分析*所有单元都既可做高压梯度又可做低压梯度进样器自动进样器手动进样器原理：（六通阀）注入方式：1）全量注入2）部分注入返回装填状态手动进样器的原理图装填状态样品注入返回柱温箱分析结果重现性好提高柱效降低柱压保证检测稳定性柱温控制的优点：色谱柱1）柱压低于150kgf/cm22）柱温在40℃左右，最高使用温度为60℃3）缓冲液pH使用范围为2～7返回ODS柱的使用注意点：*硅胶在pH为3～4时稳定性最好*碱浓度越低，流动相含

4、水量越低，硅胶越稳定。检测器LC常用检测器：紫外检测器（包括二极管阵列检测器）示差折光检测器电导检测器检测器原理：基于被分析组分对特定波长紫外光的选择性吸收定量基础：比耳定律，A＝KCL优点：1）对温度和流速不敏感2）可用于梯度洗提缺点：仅适用于测定有紫外吸收的物质紫外检测器检测器1）设定时间程序（切换检测波长等）2）双波长检测3）比例色谱，初步判断峰的纯度4）停泵扫描，确定组分最大吸收波长岛津VP系列紫外检测器功能：检测器二极管阵列检测器（SPD－M10AVP）二十一世纪标准紫外检测器色谱定性依据：保留时间

5、常规紫外检测器峰纯度二极管阵列检测器检测器1）采集三维谱图2）峰纯度检验3）光谱库检索4）可以发现单波长检测时未测到的峰二极管阵列检测器的优点：检测器原理：连续测定流通池中溶液折射率来测定试样各组分浓度。优点：通用型检测器缺点：1）对温度变化敏感2）不能用于梯度检测示差折光检测器检测器原理：根据物质在某些介质中电离后所产生的电导变化来测定电离物质含量。*离子色谱法中广泛使用的检测器*对温度变化敏感返回电导检测器数据处理岛津液相色谱数据处理单元：LC-Solution色谱工作站CLASS－VP色谱工作站C－R6

6、A色谱数据处理机C－R7A色谱数据处理机C－R8A色谱数据处理机返回