绿豆胰蛋白酶抑制剂BBI诱导肺腺癌A549细胞凋亡-论文.pdf

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1、华南师范大学学报(自然科学版)2013年5月JOURNALOFSOUTHCHINANORMALUNIVERSITY第45卷第3期Mav2013(NATURALSCIENCEEDITION)Vo1．45No．3文章编号：1000—5463(2013)03—0091—04绿豆胰蛋白酶抑制剂BBI诱导肺腺癌A549细胞凋亡王莎莎，马岳，李玉银，罗深恒，刁爱坡，龙民慧(天津科技大学生物工程学院，天津300457)摘要：研究了绿豆胰蛋白酶抑制剂BBI对人肺腺癌A549细胞增殖抑制作用和对肺腺癌A549细胞凋亡的影响．

2、结果显示：绿豆BBI对人肺腺癌A549细胞的增殖有明显抑制作用，绿豆BBI可以促使人肺腺癌A549细胞出现明显的染色质浓缩和凋-2+体，诱导人肺腺癌A549细胞的凋亡．说明绿豆BBI能抑制人肺腺癌A549细胞增殖、诱导人肺腺癌A549细胞凋亡，为绿豆BBI抗肿瘤效应提供了依据．关键词：绿豆胰蛋白酶抑制剂BBI；肺腺癌A549细胞；细胞凋亡中图分类号：R915文献标志码：Adoi：10．6054／j．jscnun．2013．04．020绿豆(Vignaradiata(Linn．)wilczek)也称青小豆，具

3、有较高的营养与保健价值，被誉为“食中药1材料与方法物”、“济世粮谷”、“清热解暑良药”．中医认为，绿豆味甘，性凉，归心、胃经，具有清热解毒、抗过敏、保1．1材料护肝脏和心血管、增强免疫力和抗肿瘤等多种功能．肺腺癌细胞A549购自美国标准菌种典藏中心研究表明，豆类具有抗肿瘤功效¨I2．从绿豆中提取(AmericanTypeCultureCollection，ATCC)；F一12K培的绿豆胰蛋白酶抑制剂(MBTI)，属于Bowman—Birk养液购自Gibco公司；胎牛血清购自杭州四季青生类型抑制剂(Bowma

4、n-Birktrypsininhibitor，简称物工程材料有限公司；MTF购自北京索莱宝科技有BBI)J．BB1首次由Bowman从大豆中分离，限公司；流式细胞仪为美国BD公司产品．Caspase3BIRK_5对此类抑制剂进行纯化并定义．BBI是单肽兔抗人抗体购自美国ABBIOTEC公司；羊抗兔二抗链，由71个氨基酸组成，包含7个二硫键，相对分子购自美国invitrogen公司；Westernblotting转膜仪购量为8×10。(单子叶植物或双子叶植物)或16×10自Bio—RAD公司．(单子叶植物)，

5、约占0．6％[63．野生大豆(GlycineSO一1．2方法ia)和栽培大豆(Glycinemax)的BBI型抑制剂组成1．2．1细胞培养将肺腺癌细胞A549用含质量．一个多基因家族．分数为10％胎牛血清，1％双抗和1％谷氨酰胺的F一BBI具有抗癌活性J，它可以抑制由多种物理12K培养液，置于37cI二、CO体积分数为5％的培或化学致癌因素引发的肿瘤，也可以抑制多种类型养箱中培养．待贴壁细胞铺满培养瓶底80％时即可的肿瘤(如鳞状细胞癌、腺癌、血管肉瘤)j，能够在传代．吸弃旧培养液，PBS漂洗细胞1遍，加适量

6、胰肿瘤形成的初始阶段逆转其发展过程．而且，BBI还蛋白酶消化，静置2～3min；倒置光学显微镜下观能影响某些癌基因的表达、某些蛋白水解反应活性察，待细胞开始收缩变圆，细胞间隙变大时弃去胰蛋以及降低诱癌因素引起的基因表达扩增．本研究观白酶，加适量培养液，用吸管吹打成单细胞悬液，分察绿豆BBI对肺腺癌细胞作用情况，证实绿豆BBI至2～3个培养瓶内，继续培养，1～2d换液1次．诱导A549细胞凋亡，为进一步研究与开发奠定了实验时取对数生长期的细胞．基础．1．2．2MTr法检测细胞的增殖情况96孑L细胞培收稿日期：

7、2012—12—02基金项目：国家自然科学基金项目(31271476)；教育部新世纪人才计划(0000202)通讯作者：龙民慧，副研究员，Email：longminhui2006@yahoo．COl／1．ca．92华南师范大学学报(自然科学版)第45卷养板培养细胞，每孔接种5000个细胞，置于37。《二、照组细胞凋亡率为3．92％，实验组40、80、160CO体积分数为5％的饱和水汽培养箱中培养，待细lxg／mL的细胞凋亡率分别为11．6％、36．3％、胞贴壁后，分别以绿豆BBI40、80、160g／mL处

8、理细43．57％，明显高于对照组凋亡率(图2)．胞．培养24h后，每孔加入20LM，rr(5rag／mE)，培1．41．2养箱避光孵育4h，用移液器小心吸去上清液，每孔枷l0加入150LDMSO，振荡混匀后在酶标仪490nm波0．806长处测吸光度(OD)值。04O．21．2．3流式细胞仪检测绿豆BBI诱导A549细胞OO凋亡将处于对数生长期的A549细胞用质量分数图1绿豆BBI对肺腺癌A549细胞增殖的影响为0