核酸扩增检测结果的分析及

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1、核酸扩增检测结果的分析及阳性结果的确认程序卫生部临床检验中心王露楠血站与医院临床核酸扩增检测的差异血站临床实验室目的缩短检测“窗口期”感染性疾病的诊断和治疗监测测定下限定性测定，越低越好定性或定量测定测定策略单人份或多人份混合单人份技术PCR和TMAPCR+产物分析（测序、杂交等）对标本制备的要求对标本必须进行核酸对核酸纯化要求低，多为手工操作纯化，且必须自动化对加样量和反应体应尽可能大，决定了稍低些（相对于血站）积的要求检测的敏感性服务对象受血者被检者（患者）血站核酸扩增检测国内目前所用的试剂及方法特点上海科华上海浩源中山达安ROCHEGrifols方法实时荧光实时荧光P

2、CR实时荧光多重实时荧光TMAPCRPCRPCR内标有有有有有HBV、各指标分管1）分管检测；各指标分管一管内多重一管内联合HCV、HIV检测2）一管内多检测PCR，不能区检测先不区检测模式重PCR，但直分是何指标分，反应性接检测三项指样本再行单标。个指标检测检测系统的HAMILTONHAMILTON混chemagicSTHAMILTONMicrolab®TECAN混样仪STARIVDPipettor混样组成混样仪、提样仪、提取仪、AR全自动核仪、COBASAmpliPrep（如混合样本）、Instrument全自动核酸提TMA检测仪（一取仪、实时实时荧光PCR酸提取仪、取

3、仪、COBASTaqMan管内完成提取、Analyzer和thePooling荧光PCR仪仪实时荧光andDataManagement扩增及杂交发光PCR仪(PDM)Software检测）实时荧光定量PCR检测的结果分析报告•线性基线期(Linearbase-linephase)•指数期初期（Thebeginningofexponentialphase）•指数期（Exponentialphase）•平台期（Plateauphase）Ct值（thresholdcycle）或CP值（crossingpoint）指的是实时监测扩增过程的荧光信号达到指数扩增时的循环周期数。有内标的

4、实时荧光PCR核酸实时荧光PCR检测结果•三管三项（HBV、HCV、HIV）检测：分别报告阳性（反应性）或阴性（非反应性）•一管三项检测：（1）不明确鉴别何种病毒报告反应性或非反应性（ROCHE）；（2）多重多色荧光检测，直接报告HBV、HCV和HIV-1阳性或阴性需要明确的几个概念•检测下限灵敏度检测限（最低检出限）LimitofDetection，LoD样本中可能被检出的分析物的最低数量（通常指在常规的实验室条件下>95%的样本可被检出）•定量范围•精密度•准确度•试剂•检测系统核酸检测---检测系统的性能指标HBVDNANumberofNumberof%Reactiv

5、es95%LowerConcentrationReactivesIndividualTestsConfidenceLimit(IU/mL)(one-sided)12.0189189100.0%98.4%5.019419798.5%96.1%4.018218996.3%93.2%3.618619794.4%90.9%1.312920064.5%58.5%0.44719124.6%19.5%TMA结果•RelativeLightUnits(RLU)•S/CO比值≥1.00为反应性（IC≤650,000RLU）；S/CO比值＜1.00为无反应（IC≥ICCutoff，同时，IC≤

6、650,000RLU）进一步鉴别检测•应采用具有相应检测下限的试剂，对不能鉴别HBV、HCV和HIV检测反应性样本进行鉴别检测。•在目前情况下，建议采用国产核酸扩增检测试剂进行鉴别检测。核酸检测---检测系统的性能指标HBVDNANumberofNumberof%Reactives95%LowerConcentrationReactivesIndividualTestsConfidenceLimit(IU/mL)(one-sided)12.0189189100.0%98.4%5.019419798.5%96.1%4.018218996.3%93.2%3.618619794.

7、4%90.9%1.312920064.5%58.5%0.44719124.6%19.5%乙型肝炎标志物检测结果分析面临的问题疾病本身1.感染的人口比例：HBsAg阳性7.18%2.感染状态：多样性、易变性3.预后：非活动性病毒携带者发展为慢性乙肝，可能进展为肝硬化、肝细胞性肝癌；乙型肝炎病毒感染相关终末期肝病或肝细胞性肝癌导致每年50-100万人死亡，并且5-10%进行肝移植。4.影响因素：宿主和病毒的因素，包括和其他病毒的共感染、饮酒、肥胖都是影响疾病进程和治疗效果的重要因素。试剂方法的改进与局限120121s-