犬源伪狂犬病病毒的分离鉴定及其主要毒力基因分子特征分析

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1、犬源伪狂犬病病毒的分离鉴定及其主要毒力基因分子特征分析12111吴发兴，邹　敏，董雅琴，刘　爽，李晓成（1.中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛　266032；2.青岛易邦生物工程有限公司，山东青岛　266114）摘　要：对发生临床疑似伪狂犬病毒（PRV）感染的牧羊犬组织样品，进行研磨、细胞接种、传代培养、细胞病变效应（CPE）观察、PCR检测、效价测定、电镜观察、IFA检测、家兔接种以及基因测序分析等，结果成功分离到1株犬源PRV毒株，命名为XJ-14株。该毒株可致PK-15细胞产生变圆、破碎、逐渐呈拉网式漂浮等-7.

2、45特征性细胞病变；PRVgE-PCR检测阳性，病毒效价达10/0.1mL；病毒粒子在电镜下呈圆形，有囊膜，直径约150nm；PRV荧光抗体检测阳性，接种家兔后可致家兔奇痒、麻痹死亡。对该毒株gC、gE、TK基因进行全基因测序，发现gE糖蛋白的48、497位各插入了1个D，另有12个氨基酸位点发生点突变，其gC蛋白氨基酸序列64~70位出现了7个氨基酸（AASTPAA）插入。结果表明，此牧羊犬病例是由PRV感染所致。关键词：犬；伪狂犬病病毒；XJ-14株；分离鉴定；毒力基因中图分类号：S851.3　　文献标识码：A　　文

3、章编号：1005-944X（2017）09-0096-06DOI：10.3969/j.issn.1005-944X.2017.09.026Isolation，IdentificationandtheMajorVirulenceGenesCharacteristicAnalysisofPseudorabiesVirusfromCanine12111WuFaxing，ZouMin，DongYaqin，LiuShuang，LiXiaocheng（1.ChinaAnimalHealthandEpidemiologyCenter，

4、Qingdao，Shandong266032；2.QingdaoYebioBioengineeringCo.，Ltd.，Qingdao，Shandong266114）Abstract：TissuesamplesfromasheepdoginfectedwithclinicallysuspectedPseudorabiesvirus（PRV）wereidentifiedbygrinding，cellculture，subculture，CPEobservation，PCRdetection，virustiterdetermi

5、nation，electronmicroscopeobservation，IFAassay，rabbitinoculationtestgenesequencingandanalysis.Asaresult，onePRVstrainwasisolatedfromdogsuccessfully，namedXJ-14strain.TheisolatewasabletocausetypicalCPEinPK-15cells，characterizedby-7.45round，broken，cellmeshandfloating.T

6、heresultofPRVgE-PCRwaspositive，withthevirustiterof10/0.1mL.Thevirusparticleswereround，withenvelope，diameterabout150nmundertheelectronmicroscope.ThereactionwithPRVfluorescentantibodywaspositive.AfterchallengingtheXJ-14isolate，therabbitsappeareditching，paralysisandd

7、eath.Themajorvirulencegenes，suchasgE，TKandgCgeneweresequencedandanalyzed.TheresultsshowedthattwoAspwereinsertedinthegEglycoprotein48and497aminoacidsite，respectively.Andtherewere12aminoacidsitesmutation.ForthegCglycoproteinsequence，therewere7aminoacidsinsertion（AA

8、STPAA）inthe64~70aminoacidsites.AlltheresultsshowedthatthedogcasewascausedbyPRV.Keywords：canine；Pseudorabiesvirus；XJ-14strain；isolationandidentification；virulenc