肾消康对糖尿病大鼠肾组织基因gna12表达的影响

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1、圆园12年10月第圆9卷第5期天津中医药Oct援圆园12熏灾燥造援圆9晕燥援5栽蚤葬灶躁蚤灶允燥怎则灶葬造燥枣栽则葬凿蚤贼蚤燥灶葬造悦澡蚤灶藻泽藻酝藻凿蚤糟蚤灶藻469肾消康对糖尿病大鼠肾组织基因Gna12表达的影响*乔羽，解颖，白玉宾，王兵，陈飞，刘春红，柳成刚，常佳怡，高恩宇，韩洁茹，姜德友（黑龙江中医药大学基础医学院，哈尔滨150040）摘要：[目的]观察中药复方肾消康对糖尿病肾病大鼠的防治作用及对肾脏基因表达的影响，探讨糖尿病肾病（DN）的发病机制，揭示中药复方肾消康防治DN的作用机制，筛选药效作用靶点，为临床推广应用提供科学依据。[方

2、法]本实验采用链脲佐菌素（STZ）加高热量饮食建立糖尿病大鼠肾脏损伤模型。运用放免、生化、光镜、电镜及美国Affymetrix公司的基因表达谱芯片、逆转录聚合酶链反应法（RT原PCR）等先进检测手段和方法，观察了多项指标，尤其是通过聚类分析寻找和DN有重要相关性的基因，并进一步采用实时荧光定量RT-PCR法做验证实验研究。[结果]鸟嘌呤核苷酸结合蛋白琢12（Gna12），在糖尿病大鼠肾脏表达下调，肾消康中剂量组表达上调。[结论]应用AffymetrixRat2302.0基因表达谱芯片检测糖尿病大鼠肾脏基因的表达，Gna12是筛选出的肾脏差异表达

3、基因和药效靶点之一，并对该基因做荧光定量RT-PCR测序分析。基因功能分析表明，在糖尿病状态下，Gna12表达下调，与糖尿病肾脏损伤有重要相关性，而经肾消康治疗后大鼠肾脏组织中Gna12表达上调，可见肾消康对Gna12基因表达具有良性调节作用，其作用机制还有待于进一步研究。关键词：肾消康；糖尿病；肾脏损伤；基因表达谱；鸟嘌呤核苷酸结合蛋白琢12中图分类号：R587.1文献标识码：A文章编号：1672-1519（2012）05-0469-06糖尿病肾病（DN）是糖尿病的一种严重的微血（Gna12）表达的影响。管并发症，其主要病理改变为肾小球肥大，

4、基底膜1基因芯片实验增厚，以及系膜区基质增加，导致弥漫性或结节性1.1主要试剂、药品和仪器链脲佐菌素（STZ）为肾小球硬化。临床上早期表现为尿中排出微量白蛋Calbiochem公司产品；肾消康制成浸膏，由黑龙江中白，继之出现临床蛋白尿，最后进展为慢性肾功能医药大学附属第一医院制剂室制备，-20益的冰箱不全。近年来随着其发病率和病死率的提高，DN严保存，使用前加温至37益。有关芯片检测试剂及仪器，重地威胁着人类的健康，影响患者的生存质量，因此，均为上海生物芯片有限公司制备，包括Affymetrix对DN的研究已成为世界性医学攻关课题。由于该Gen

5、echipScanner2.0、AffymetrixFluidicsStation450、病的发病机制较复杂，临床尚无理想药物，而中医AffymetrixGenechipHybridizationOven640等。药在防治DN方面颇具优势，为此笔者借助分子生物学1.2动物造模及分组Wistar大鼠120只，雄性，体研究方法，采用基因芯片技术，利用目前国际学术质量180~210g（由哈尔滨医科大学实验中心提供），界公认的美国Affymetrix公司生产的Rat2302.0基合格证号：P00102004，分笼饲养，每笼饲养7只，室因表达谱芯片，首先

6、进行差异基因筛选，然后进一温（18依2）益，相对湿度50%耀60%，通风良好，每日步用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR）光照12h，自由摄食、饮水。适应性喂养1周后，随检测，寻找DN相关基因，探讨DN病变机制，筛选机选取10只作为空白对照组，以普通饲料喂养，经药效靶点，阐释中药复方肾消康治疗DN的作用机左下腹注射柠檬酸缓冲液25mg/kg（pH4.4），其余制，为此笔者对链脲佐菌素（STZ）诱导DN大鼠的肾大鼠称质量，以25mg/kgSTZ左下腹腔注射，每日脏基因表达谱进行了研究。本文仅报告肾消康对上午注射1次，连续5d。注射前1

7、2h禁食，不禁水。DN大鼠肾脏组织基因鸟嘌呤核苷酸结合蛋白琢12注射后1h，大鼠自由饮水、进食。造模1周后测血糖。血糖值在16.7mmol以上的大鼠共50只，再随*基金项目：黑龙江省杰出青年科学基金课题项目（2070222）。机分为模型组、西药对照组、肾消康高、中、低治疗作者简介：乔羽（1983-），女，硕士，讲师，主要从事中医临组，各组均10只。各组均喂以高热量饲料（1豫胆固床基础研究。通讯作者：姜德友。醇、10豫猪油、10豫蛋黄粉、1豫蔗糖、78豫为基础饲天津中医药圆园12年10月第圆9卷第5期470栽蚤葬灶躁蚤灶允燥怎则灶葬造燥枣栽则葬凿

8、蚤贼蚤燥灶葬造悦澡蚤灶藻泽藻酝藻凿蚤糟蚤灶藻Oct援圆园12熏灾燥造援圆9晕燥援5料）19周，继续喂养普通饲料7周，共喂养26周。1.6.2尿微量白蛋