大黄鱼小黄鱼实时荧光PCR鉴定-论文.pdf

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1、辽宁大学学报JoURNALoFLlAoNINGUNlvERslTY自然科学版NaturalSciencesEtion第4l卷第2期2014年Vo1．41NO．22014大黄鱼小黄鱼实时荧光PCR鉴定娄虹，张学敏，李强，金莉莉，王秋雨(辽宁大学生命科学院，辽宁沈阳110036)摘要：目的：建立一种快速、准确的大黄鱼小黄鱼实时荧光PCR鉴定方法．方法：根据GenBank中大黄鱼、小黄鱼线粒体中ND6基因的序列，设计并合成特异性引物和cycling探针，以草鱼为阴性对照，进行实时荧光PCR反应．结果：利用设计合成的大黄鱼和小黄鱼特异性引物和cycling探针进行实时荧光

2、PCR反应，大黄鱼和小黄鱼均产生特异扩增曲线，对照的草鱼没有产生扩增曲线．结论：利用设计的引物和cycling探针，可准确快速鉴定大黄鱼和小黄鱼．关键词：大黄鱼；小黄鱼；Cycling探针；实时荧光PCR；鉴定中图分类号：Q812文献标志码：A文章编号：1000—5846(2014)02-0168-04IdentificationofPseuosciaenacroceaandPseudosciaenapolyaticsbyRea1．timeRCRLOUHong，ZHANGXue-min，LIQiang，JINLi—li，WANGQiu—yu(LifeScience

3、，LiaoningUniversity，Shenyang110036，China)Abstract：Aim：Establisharapidandaccuraterea1．timePCRmethodtoidentifyPseudosciaenacroceaandPseudosciaenapolyatics．Methods：SpecificprimersandcyclingprobeweredesignedandsynthesizedaccordingtoND6genesequenceinthemitochondriaofPseudosciaenacroceaandP

4、seudosciaenapolyatics，andthenegativecontrolwasC~nopharyngodonidellus．TheyweredetectedbythereactionofReal—timePCR．Results：SpecificamplificationplotsweregeneratedinreactionsofRea1．timePCRwiththemitochondrialDNAofPseudosciaenacroceaandPseudosciaenapolyatics，andwasnotwithCtenopharyngodoni

5、dellus．Conclusion：PseudosciaenacroceaandPseudosciaenapolyaticsCanbequicklyandaccuratelyidentifiedbyReal-timePCRwithdesignedprimersandcyclingprobe．Keywords：Pseudosciaenacrocea；Pseudosciaenapolyatics；cyclingprobe；real—timePCR；identification收稿日期：2013—12—12基金项目：辽宁大学博士资助项目(2011005)作者简介：娄虹(

6、1962一)，女，实验师，从事食品生物技术研究．十通讯作者：王秋雨(1961一)，男，博士，教授，E—mail：qiuyuwang@lnu．edu．cn第2期娄虹，等：大黄鱼小黄鱼实时荧光PCR鉴定1690引言大黄鱼(Pseudosciaenacrocea)、小黄鱼(Pseudosciaenapolyatics)隶属于脊椎动物亚门，鱼纲，硬骨鱼亚纲，鲈形目，石首鱼科，黄鱼属，为传统“四大海产”鱼类之一1j，其味道鲜美，具有较高的经济价值．大黄鱼、小黄鱼亲缘关系十分相近，外形相似，加工处理后的产品更难于通过形态上的差异进行鉴定．在利益的驱使下，不法商贩利用染色剂对其

7、它鱼类或制品进行染色冒充大黄鱼、小黄鱼及其制品，这不仅造成市场混乱，长期服用经过染色的“黄鱼”，还将对人体的肝脏、肾脏造成伤害，过量使用甚至可以诱发癌症，影响民众健康安全．因此，建立快速有效的鉴别大黄鱼、小黄鱼方法具有重要的实践意义．Cycling探针实时荧光PCR法特异性较强，它是由RNA和DNA构成的杂合Cycling探针与RNaseH酶组合使用的高灵敏度检测技术，能够高效率地检出目的基因_2J．Cycling探针内部含有RNA碱基、5端标记荧光物质、3端标记淬灭物质，当探针处于完整状态时，由于荧光淬灭作用抑制荧光物质发出荧光．当探针与扩增产物中互补序列杂交后

8、，RNas