核型多角体病毒对斜纹夜蛾酚氧化酶活性及血淋巴黑化的影响

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1、第33卷第1期华中农业大学学报Vo1．33No．12014年1月JournalofHuazhongAgriculturalUniversityJan．2014。47～5O核型多角体病毒对斜纹夜蛾酚氧化酶活性及血淋巴黑化的影响季香云包杨滨万年峰蒋杰贤谭继才1．上海市农业科学院生态环境保护研究所／上海市设施园艺技术重点实验室，上海201403；2．湖南农业大学生物安全科学技术学院，长沙410128摘要以斜纹夜蛾核型多角体病毒(S1NPV)为免疫刺激因子，观察S1NPV对斜纹夜蛾幼虫酚氧化酶活性及其血淋巴黑化的影响。结果表明：斜纹夜蛾幼虫感毒后，其

2、血淋巴黑化率在感毒1d后开始逐渐下降，随着感毒时间推移和幼虫日龄增大，病毒抑制其黑化作用增强；在感毒后连续5d观察时间内，感毒幼虫血淋巴黑化率始终低于健康幼虫，且在感毒4～5d后达到显著水平；感毒幼虫体内及其血淋巴酚氧化酶活性在感毒后前3d都是逐渐上升而后逐渐下降；感毒幼虫体内酚氧化酶活性在感毒后前3d高于健康幼虫，在感毒4d后开始低于健康幼虫，且在感毒2、3、5d后均达到显著水平；与健康幼虫相比，感毒幼虫血淋巴酚氧化酶活性在感毒2d后开始明显增强，但感毒5d后急剧下降。关键词斜纹夜蛾核型多角体病毒(SlNPV)；斜纹夜蛾；黑化反应；酚氧化酶

3、；血淋巴中图分类号Q965．9文献标识码A文章编号i000—2421(2014)01—0047—04斜纹夜蛾Spodopteralitura(Fabriciu)属鳞翅斜纹夜蛾酚氧化酶和黑化反应的影响，旨在为研究目夜蛾科，是爆发性害虫之一，严重影响农作物的生病毒感染对靶标昆虫的免疫机制提供科学依据。长和蔬菜的产量与品质。斜纹夜蛾核型多角体病毒1材料与方法(Spodopteralituranuclearpolyhedrosisvirus，S1NPV)是斜纹夜蛾自然种群密度的重要调节因子，1．1供试材料室内或田问试验均发现该病毒有很强的毒力，在斜斜

4、纹夜蛾核型多角体病毒(slNPV)系2011年纹夜蛾的防治中具有重要作用J。8月从上海市奉贤区菜地上采集感病的斜纹夜蛾幼昆虫在受到外来病原物侵染后会产生体液免疫虫，在室内经宿主幼虫增殖2次后所得。试验时将和细胞免疫，其中酚氧化酶(phenoloxidase，PO)是斜纹夜蛾幼虫的虫尸匀浆后进行粗提，粗提液经差重要的体液免疫因子。在免疫抑制过程中，昆虫机速离心并稀释至试验所需浓度。供试斜纹夜蛾均用体往往会通过黑化作用清除外来侵染物，而酚氧化人工饲料(主要成份为麦胚、黄豆粉、抗坏血酸、酵酶是催化黑色素形成的重要调节因子。已有的研究母、干酪素等)在

5、人工气候培养箱中喂养。斜纹夜蛾结果表明，真菌、细菌、病毒、寄生虫等外来病原物侵饲养条件：温度(28±1)℃、相对湿度8O％±5

6、的酚氧化酶活性。病毒接种浓度为1．68×病毒为免疫刺激因子，观察核型多角体病毒感染对10。OB／mL。对照为同等大小、同龄期健康的斜纹收稿日期：201304—28基金项目：国家自然科学基金项目(31171904)、上海市科委青年科技启明星项目(12QB1402500)、上海市重点基础研究项目(11JC141150o)和上海市科委科技专项(123919N0400)季香云，博士，副研究员．研究方向：害虫综合治理．E—mail：hwfy2002@163．COIII通信作者：蒋杰贤，博士，研究员．研究方向：害虫生态治理．Email：jiangjiex

7、ian@163．corn华中农业大学学报第33卷幼。感毒幼虫和健康幼虫各300头，每处理2结果与分析重复3次。H、。J。1．3酶液提取2．1SINPV对幼虫血淋巴黑化率的影响取存活斜纹夜蛾幼虫虫体放入匀浆器中，加入由图1可知，在连续5d的观察时间内，健康斜CAC缓冲液，在冰上充分研磨，研磨后在4℃、纹夜蛾幼虫血淋巴黑化率始终为100，而感毒斜10000r／rain下离心10min，取上清液，离心2～3纹夜蛾幼虫黑化率在感毒1d后开始逐渐下降。这次，直至无大颗粒为止，取上清液即为粗酶液。表明核型多角体病毒感染在斜纹夜蛾幼虫体内发挥1．4血淋巴收

8、集了重要作用，随着感毒后时间推移和宿主日龄增大，用医用解剖针挑破存活斜纹夜蛾幼虫第3和第病毒抑制宿主幼虫血淋巴黑化作用增强。4腹节之间的腹部，在冰冻的抗凝剂缓冲液中