一种适用于家蚕核型多角体病毒的PCR检测方法.pdf

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1、5一ci‘enceo，e{^。2013，39(6)：1202—1205ISSN0257—4799；CN32—1115／SE—mail：CYKE@chinajourna1．net．cn一种适用于家蚕核型多角体病毒的PCR检测方法唐芬芬杨伟克钟健邵榆岚李平平刘增虎白兴荣(云南省农业科学院蚕桑蜜蜂研究所，云南蒙自661101)摘要建立家蚕核型多角体病毒(BmNPV)的快速检测技术，有利于病害的早期诊断。选择家蚕核型多角体病毒极早期基因pe38为靶基因设计特异性检测引物，对不同浓度BmNPV基因组DNA模板及含有pe38的重组质粒pMD18-pe38标准品进行PCR检测，结果扩增出BmNPV37

2、0bp的特异性片段，病毒多角体的最低检测浓度为4．86×10mL～，标准质粒的最低检测量为0．7Pg。将BmNPV感染家蚕幼虫后不同时间取其血淋巴用于PCR检测方法的验证，结果表明，接种病毒多角体浓度为4．86X10。mLI1时，感染36h后取样的幼虫血淋巴中能扩增出370bp的病毒特异条带，可检出病毒的时间随添毒浓度的递减而延迟。该检测方法具有较好的特异性和灵敏度。关键词家蚕核型多角体病毒；PCR；pe38基因中图分类号$884．51；Q789文献标识码B文章编号0257—4799(2013)06—1202—04AnApplicableMethodforDetectionofBomby

3、xrnoriNucleop0lyhe-drovirusbyPCRTANGFen--FenYANGWei-KeZHONGJianSHAOYu--LanLIPing··PingLIUZeng·HuBAIXing—Rong(InstituteofSericultureandApiculture，YunnanAcademyofAgriculturalSciences，MengziYunnan661101，China)AbstractDevelopmentofrapiddetectionmethodwiljfacilitateearlydiagnoseofBombyxmorinucleOpO1yh

4、edrOvirus(BmNPV)．Inthispaper，immediate—earlygenepd38ofBmNPVwasselectedasthetargetgenetodesignspecificprim—ers．COnsequentIV，wedetecteddifferentc0ncentratiOnsOfBmNPVgenomicDNAandthestandardrecombinantplasmidpMD@18-pe38carryingpd38byPCR．Asaresult．aspecificfragmentof370bpwasamplified．Thelowestdetecta

5、bleconcentrationofvirafpolyhedrawas4．86x10。mL～．andtheminimumdetectableamountofstandardplasmidwas0．7PgPCRamplificationwasconductedtoverifythisdetectionmethodbyusinghemolymphsamplesfrOmthesilkwormlar—vaeinfectedbvBmNPVatdifferenttimepoints．Theresultsshowedlhata370bpspecificbandwasdetectedinhemo—Ivm

6、Dhofsilkwormlarvaeat36hafterinfectionwith4．8610mL～BmNPVpolyhedra．Thetimerequiredtodetectviruswasdelayedwiththedecreasingofvirusdosageadministered．Thisdetectionmethodhashighspecificityandsensitivity．KeywordsBombyxmorinucIe0pOIyhedrOVIrus；Polymerasechainreaction；pe38gene由家蚕核型多角体病毒(Bombyxmorinucle一o

7、polyhedrovirus，BmNPV)侵染家蚕引起的家蚕核型多角体病(血液型脓病)是家蚕的主要病害之一，特收稿日期：2013—02—26接受日期：2013—07—21别是在夏秋蚕期该病易暴发流行，给养蚕生产造成资助项目：云南省现代农业产业技术体系专项，云南省农业科学院严重的经济损失。BmNPV属于杆状病毒科仅杆状蚕桑蜜蜂研究所青年基金项目(No．OC2012002)。第一作者信息：唐芬芬(1985一)，女，实习研究员。病毒属¨，