低氧细胞模型的研究进展.pdf

《低氧细胞模型的研究进展.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、CHINESEJOURNAL0FANAT0MYV01．37No．22014解剖学杂志2014年第37卷第2期F34]ChenCW，ChenQB，OuyangQ，eta1．Transientearlyneuro-[,353LeeCY，LandrethGE．Theroleofmierogliainamyloidc1ea_trophinreleaseanddelayedinflammatorycytokinereleasebyrancefromtheADbrain[-J]．JNeuralTransm，2010，117(8)：microgliainresponsetoPAR

2、-2stimulation[,J]．JNeuroinflamma一949—960．tion，2012，9(1)：142．(编辑：黄会龙)低氧细胞模型的研究进展赵剑锋傅惠英吕伯东。△(浙江中医药大学，1第二临床医学院，杭州310053；2附属第二医院，杭州310005)细胞是有机体结构和功能的基本单位，对细胞的认识与理糖分，细胞处于模拟不完全慢性缺血缺氧状态，该模型中内皮细解是生命科学的研究基础_1]。体外培养是将有机体的活细胞放胞缺血缺氧后细胞形态发生显著改变，尤其48h后内皮细胞内在类似于体内环境的体外环境中生长和发育的方法，由于体外出现的空泡样变性随时间增加而增

3、加，为细胞缺血缺氧的典型培养的细胞成分单一，环境因素易于控制、重复性好，故成为疾改变，时间越长形态改变越显著。随缺血缺氧时间的增加，内皮病研究的重要手段。缺氧是目前造成细胞和组织损伤常见而重细胞Ⅷ因子相关抗原的表达也相应增加，提示内皮细胞受到渐要的原因。缺氧可以诱发机体各系统的功能改变，是造成临床进性损伤。该模型操作简便，价格低廉，但石蜡的边缘密封可能多种疾病的主要病理过程之一，也是导致机体死亡的重要因素，不完全，且无法去除培养液中残余氧气，无法控制缺氧参数，重因此缺氧的研究越来越受到关注。缺氧是指当组织和细胞得不复性较差，一般较少使用。到充足的氧，或用氧障碍，不能

4、充分利用氧时，组织和细胞的代1．2．2混合气体培养法此种方法较常见，应用也非常普遍，谢、功能，甚至形态结构都可能发生异常变化的病理过程_2]。细国内各实验室广泛使用自制简易密闭容器，容器上有进气孔和胞缺氧是缺血缺氧性疾病发病机制中的关键环节，所以细胞缺出气孔，通气前将细胞放于容器内，由进气孔通人氮气(Nz)和氧模型是从细胞、分子水平研究此类疾病的重要方法。现就体CO2混合气体，容器内气体经出气孔排出。李高峰等[7详细描外培养细胞缺氧模型的制备及其特点进行综述。述了此方法的原理，如建立1个5氧气(02)和5COz的低目前建立缺氧模型的方法主要有3种：低糖、低氧、低氧低

5、氧模型，平衡后培养箱内02仅来源于充气前培养箱内所含的空糖。而致缺氧的方法主要有物理缺氧和化学缺氧_3]。气。因此，在充气平衡后空气所占的比例为5／21，混合气体所占的比例为16／21。因为COz的浓度为5，所以混合气体中CO21低氧模型所占的百分比为5％／(16／21)一6．56，N所占的百分比为1．I化学性缺氧模型1～6．56一93．44％。苗兰英等l8用此方法建立低氧模型，化学性缺氧是指在培养基中加人某种化学物质，如氰化物、并用血气分析测氧分压，达到所需要的缺氧条件，表明人体内皮连二亚硫酸钠、氯化钴等，造成细胞用氧障碍或者耗尽培养基内细胞在低氧24h以后出现形

6、态学的变化，细胞结构不完整，只有的氧气。张君等[4]用不同浓度的氯化钴诱导小鼠胚胎成纤维细少量的细胞结构可见，细胞损伤明显，大量死亡。此时，内皮细胞24h。当浓度达到500tzmol／L以上时，细胞的增殖活力明显胞存活率降低、LDH释放增加，细胞骨架破碎。朱浩等使用受到抑制，凋亡与坏死显著增多。正常情况下细胞中检测不到相同方法建立体外培养施万细胞，参照Hori等[1o]方法稍加改缺氧诱导因子1a(hypoxiainduciblefactorla，HIF_1a)，经氯化进，自制有机玻璃盒，两端各有一孔(出气孔和人气孑L)。样本放钴诱导后HIF_1a的表达增加。随着氯化

7、钻浓度的增加，促凋亡人盒中后，通人体积分数为5C02和95N2，维持一定湿度，蛋白Pax的表达逐渐增加，而抗凋亡蛋白Bcl一2的表达则逐渐减并用测氧仪检测盒中的氧含量，待到氧浓度小于1时封闭两少。这种化学缺氧模型操作简单，使用方便，不受外界环境因素孔。通过镜下观察和H—E染色显示，缺氧10rain细胞形态无明影响，重复性好，但不同的细胞所需的氯化钻诱导浓度亦不同，显变化；缺氧15rain后，细胞突起回缩，细胞聚集、胞质胞核着色且添加物可能会改变培养基的化学成分，增加实验复杂因素，且较深，核仁不清楚；缺氧20min后，细胞呈小圆形，胞质胞核深缺氧时间和程度不易控制