两种嵌合乙型肝炎病毒preSl中和表位的乙肝核心病毒样颗粒的制备与抗原性分析-论文.pdf

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1、·336·中华实验和临床病毒学杂志2013年lO月第27卷第5期ChineseJExpClinVirol，October2013，Vo1．27，No．5．论著两种嵌合乙型肝炎病毒preS1中和表位的乙肝核心病毒样颗粒的制备与抗原性分析苏秋东，郭敏卓，伊瑶，陈斯勇，贾志远，卢学新，邱丰，毕胜利【摘要】目的构建嵌合preS12147位氨基酸(aa)、以全长乙肝病毒(HBV)核心抗原(HBcAg)为骨架的病毒样颗粒H2和嵌合preS1aa3745、以截断HBcAg为骨架的病毒样颗粒H3，并对比其抗原性。方法将HBVadr血清型preS1中和表位aa2147和aa3745分别插入到全长

2、HBc(aa1．183)和截断HBc(aa1．144)的第78位天冬氨酸和第79位脯氨酸之间，密码子优化之后全基因合成，目的片段经双酶切(NdeI和XhoI)回收后连接到同样处理的pET43．1a载体上，在大肠埃希菌E．coliBL21(DE3)中表达，精细纯化后通过电镜观察蛋白形态、ELISA以及WesternBlott检测其抗原性。结果成功构建表达质粒H2和H3，并在BL21(DE3)中高效表达和自发组装成病毒样颗粒。纯化后电镜观察H2和H3形态为二十面体立体对称样病毒样颗粒，H2为实心颗粒，直径为(31．614-1．27)nm，H3为空心颗粒，直径为(28．46±1．16

3、)nm。统计分析可得H2直径要比H3直径大(P<0．01)。ELISA和WesternBlott检测结果证实其插入表位preS1以及载体蛋白HBe的抗原性。结论成功获得两种嵌合HBVpreS1中和表位的病毒样颗粒，为其在疫苗研究中的应用探索奠定基础。【主题词】肝炎病毒，乙型；表位；病毒核心蛋白质类；病毒样颗粒AntigenicanalysisoftwochimerichepatitisBcoreparticlespresentingthepreS1neutralizingepitopesSUQiu—dong‘，GUOMin—zhuo，YIYao，CHENSi—yong，flAZ

4、hi—yuan，LUXue—xin，QIUFeng，BISheng—li．NationalInstituteforViralDiseaseandPrevention，ChinaCDC，Beng102206，ChinaCorrespondingauthor：BISheng—li，Email：shengli—hi@163．corn【Abstract】0bjectiveToconstructfull—lengthhepatitisBcoreparticlespresentingpreS1aa2147epitopeandtruncatedcoreparticlespresentingp

5、reS1aa3745epitopeontheirsurfaceandcomparetheirantigenicity．MethodsPreS1aa21-47epitopeandaa3745epitopewereinsertedrespectivelyintofull—lengthhepatitisBcore(aa1—183)andtruncatedHBcAg(aa1—144)，betweenthe78(Asp)and79(Pro)．ThegenessynthesizedafterthecodonoptimizationwereligatedtothepET43．1avector

6、withthesamecohesiveterminal(NdeIandXhoI)andexpressedintheE．coliexpressionsystem．ThemorphologyoftheproteinsofinterestwereobservedbyelectronmicroscopeandcharacterizedbyELISAandWesternBlotting．ResultsThemorphologyofthevirus—likeparticleswereconfirmedbyelectronmicroscope．H2weresolidparticleswith

7、adiameterof(31．61±1．27)nm，whileH3werehollowparticleswithadiameterof(28．464-1．16)／lm．StatisticalanalysisshowedthatH2islargerthanH3inthediameter(P<0．01)。TheantigenicityoftheinsertedepitopesandcarrierproteinwereidentifiedbyELISAandWesternBlotting．Conc