LPS致肝细胞损伤模型的建立研究-论文.pdf

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1、安徽农业科学，JournalofAnhuiA．Sei．2014，42(4)：1071—1073责任编辑陈玉敏责任校对卢瑶LPS致肝细胞损伤模型的建立研究滕芳芳，胡晓斐，刘晨晨，杨最素，黄芳芳，丁国芳(1．浙江海洋学院食品与医药学院，浙江省海洋生物医用制品重点工程技术研究中心，浙江舟山316022；2．浙江省舟山医院，浙江舟山316021)摘要[目的]探索LPS体外致人ChangHver细胞损伤模型的建立方法和意义。[方法]分别用20．40、60、80、100g／rnl浓度的LPS作用ChangLiver细胞24h，采用M

2、TF法检测LPS对ChangLiver细胞存活率的影响，分别测定ChangLiver细胞上清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、一谷氨酰转肽酶(．Y—GT)、乳酸脱氢酶(IJDH)的活性，并通过Hoeehst33258荧光染色观察用药24h后ChangLiver细胞形态的变化。[结果]8O和100晷／ml浓度的LPS作用后ChangLiver细胞存活率显著性降低，胞外AsT、ALT、ALP、．GT、EDH酶活性升高，细胞数目减少，细胞形态发生改变，呈现细胞核固缩等细胞凋亡现象。(结论]用8

3、0g／ml的LPS与ChangLiver细胞共培养24h，可以建立理想的体外肝细胞损伤模型。关键词LPS；ChangLiver细胞；AST；ALT；Hoechst33258中图分类号S986．2文献标识码A文章编号0517—661l(2014)04—01o71—03T0EstablishandResearchLiverCellInjuryModelInducedbyLPsTENGFang-fang，DGGuo-fangetal(ZhejiangProvincialKeyEngineeringTechnologyResea

4、rchCenterofMarineBiomedicalProducts，SehoolofFoodScienceandPharrnacyofZheiiangOceanUniversity，Zhoushan。Zhejiang316022)AbstractlObjective1T0establishinvitroLPS．inducedChangLivercellsdamagemode1．IMethod!AfterreceivedLPS24hatdifferentcoil-centrations(20，4JD，60，80，1o0

5、g／m1)，ChangLivercellsviabilityeffectsweredetectedbyM．ITI1methods，andtheAST，ALT，ALP，一GT，LDHactivityinceUsupernatantweremeasured．TheChangLivercellsmorphologychangeswereshowedbyHoeehst33258staining．【Resuit【ChangLivercellviabilitywassignificantlyreducedwithLPsin80and

6、10onl1．AsT，ALT，ALP，_y—GT，LDHactivityincellsupematantwereincreased；thenumberofceilswerereduced；ceUmorphologywaschangedshowingcellapoptosiswithnuclearcondensation．1ConclusionlChangLivercellsco．culturedwith80ug／mlU)smightbeanidealnvitromodelofhepatocellularinjury．Ke

7、ywordsU；ChangLivercells：AsT；ALT：Hoechst33258脂多糖(Lipopolysaccharides，LPS)是革兰氏阴性菌细胞1材料与方法壁外膜的成分，其主要是由亲水的多糖和疏水的类脂A组1．1材料成。LPS可诱导多种细胞凋亡造成多种细胞损伤，如巨噬细1．1．1研究对象。正常人肝细胞：张氏肝细胞(ChangLiv—胞RAW264．7、人小肺癌细胞NCL．H446、神经细胞PC12、人er)购自中南大学湘雅医学院细胞中心。子宫颈癌传代细胞Helacell等。1．1．2主要试剂与设备。大肠

8、杆菌脂多糖(o111：B4LPS)、不同的诱因导致不同的慢性肝病，有病毒性肝炎、成药RPMI1640、四氮唑蓝(MTr)，均购自Sigma公司；丙酮酸钠物性肝病、非酒精性脂肪性肝炎、自身免疫性肝病等均能造购自国药集团化学试剂有限公司；胎牛血清购自杭州四季青成肝细胞损伤，肝细胞损伤是肝病的共同病理基础，是公司；AST、