鳜鱼肌球蛋白重链基因的原核表达及多克隆抗体的制备.pdf

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1、2012年12月湖南师范大学自然科学学报Vo1．35No．6第35卷第6期JournalofNaturalScienceofHunanNormalUniversityDec．，2012鳜鱼肌球蛋白重链基因的原核表达及多克隆抗体的制备刘希良，王开卓，成嘉，蒙涛，陈敦学，李玉珑，张红芳。，张建社，褚武英(1．长沙大学生物工程与环境科学系，中国长沙410003；2．广西师范大学生命科学学院，中国桂林541004；3．九江学院生命科学系，中国九江332005)摘要肌球蛋白重链(MyHC)是肌肉中的主要结构和功能蛋白，在肌肉收缩过程中起关键作用．根据鳜鱼肌球蛋白重链基因

2、中高亲水性区域DNA设计一对特异性引物，将该基因片段亚克隆到pET一32a质粒，构建重组表达载体并转化人大肠杆菌BL21中．诱导条件优化实验结果显示，该菌株经0．8mmol／LIPTG诱导3h可大量表达融合蛋白．将经亲和层析纯化后的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体．ELISA和免疫组化测试结果表明：此抗体有较好的特异性和抗原性．鳜鱼MyHC基因表达的研究为深入研究肌球蛋白重链的功能特性及其对肉质性状的影响奠定基础，为提高鱼类肉质提供理论基础和技术支持．关键词鳜鱼；肌球蛋白重链；原核表达；多克隆抗体中图分类号Q785文献标识码A文章编号1000—2537(

3、2012)06-0067-07ProkaryoticExpressionandPreparationofPolyclonalAntibodyofMyosinHeavyChainGenesinSinipercaChuatsiLIUXi—liang，WANGKai．zhuo，CHENGJia，MENGTao，CHENDun—XU．e，Yu．1ong，ZHANGHong-fang，ZHANGJian．she，CHUWu—ying(1．DepartmentofBiotechnologyandEnvironmentalScience，ChangshaUniversity

4、，Changsha410003，China；2．CollegeofLifeScience，GuangxiNormalUniversity，Guilin541004，China；3．CoUegeofLifeScience，JiujiangUniversity，Jiujiang332005，China)AbstractMyosinheavychain(MyHC)isoneofthemajorstructuralandcontractingproteinsofmuscle．Inthisstudy，theMyHCfragmentofSinipercachuatsiwa

5、ssubclonedintoplasmidpET-32atoconstructaHis—taggedrecombinantplasmidpET-MyHC．ThevectorwastransformedintoE．coliBI21toexpresstheHis—MyHCfusionproteininthebacteriaunderinductionofIPTG．1'hefusionproteinofabout40000wasexpressedandconfirmedbySDS—PAGEandWesternblot．TheconcentrationoftheIPT

6、Gandthelengthofinducingtimethataffectedthepro一、teinexpressionlevelwereoptimized．Itwasfoundthattheproteincanbeexpressedathi．ghlevelafterbeingin—ducedby0．8mmol／LIPTGfor3h．Afterpurificationbyone—stepaffinitychromatography，thefusionproteinwasinjectedintoNewZealandrabbitstopreparepolyclo

7、nalantibody．ThentheantibodywastestedbyELISA，andtheresultsshowedthattheantibodyhadfinespecificity．ThisworkontheMyHCgenefromtheSinipercachuatsiaddedusefulinformationforfishmolecularbiologyandfishgenomics．KeywordsSinipercachuatsi；MyHC；prokaryoticexpression；polyclonalantibody肌球蛋白是肌肉主要构成

8、蛋白质之一．它由Kuhne于1859年