间接ELISA在猪瘟抗体检测上的应用.pdf

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1、动物医学进展。2012，33(6)：126—129ProgressinVeterinaryMedicine零瞩专论与讲座％间接ELISA在猪瘟抗体检测上的应用李娇，沈志强，祖立闯，王金良。，谢金文z(1．山东绿都生物科技有限公司，山东滨州256600；2．山东省滨州畜牧兽医研究院，山东滨州256600)摘要：间接ELISA以其灵敏、特异、简单、快速、稳定、高通量及易于操作等优点，在猪瘟免疫猪群抗体水平监测、猪瘟的快速诊断与流行病学调查中得到了广泛应用，显示出了良好的应用前景。论文就间接ELISA方法及其在猪瘟诊断上的应用概况做一综述，以期为我国

2、猪瘟的综合防控提供参考。关键词：间接ELISA；猪瘟；抗体；检测．中图分类号：$852．651文献标识码：B文章编号：1007—5038(2012)06—0126—04猪瘟(Classicalswinefever，CSF)是由猪瘟病毒用的有直接法、间接法、夹心法、竞争法(阻断法)。(Classicalswinefevervirus，CSFV)引起猪在临床间接ELISA是检测抗体最常用的方法，其原理为利上主要以稽留高热、皮肤和黏膜出现大量出血点为用酶标记的抗抗体(酶标二抗)检测与固相抗原结合主要特征的一种高度接触性、致死性传染病[】]。猪的受检抗

3、体(一抗)，首先用特异性抗原包被固相载瘟病毒主要通过呼吸道和消化道传染，传播速度快，体，加入待测抗体(一抗)，使之与固相抗原结合；再发病率和病死率高，给全球养猪业带来了巨大的经加入酶标记的抗抗体(酶标二抗)，使之与待测抗体济损失]。猪瘟被世界动物卫生组织(OIE)列为结合；再加入底物显色液，显色颜色的深浅与待测抗必须报告的动物传染病，被我国列为一类动物疫病，体的量成正比。是危害我国养猪业最严重的动物疫病之一l_7]。猪瘟此方法的优点有：①检测面广，只要更换包被抗的诊断方法主要包括病毒的分离与鉴定、血清学及原就可利用同一个酶标二抗建立检测相应疫病

4、抗体分子生物学检测方法]。其中，血清学检测方法是的方法；②检测快速，一般只要2h～3h就可以给出猪瘟诊断的重要手段，也是免疫猪群抗体水平监测结果；③简单方便，操作步骤简单、对操作人员无特的主要方法，对猪瘟流行状态的监测、疫苗免疫效果殊技能要求；④稳定性好，使用同一批纯化抗原、酶评价及免疫程序的制定均具有重要意义]。猪瘟常标抗体，具有良好的可重复性；⑤特异性强，抗原抗规的血清学检测方法主要有病毒中和试验、间接血体的结合依赖于抗原决定簇与抗体特定化学结构和凝试验、间接免疫荧光试验、ELISA、胶体金免疫层空间构型的互补关系，具有高度的专一性；⑥灵敏

5、度析等，其中间接ELISA具有简单、快捷、敏感、特异、高，酶的催化可极大的放大反应效果，达到很高的敏高通量等优点，在猪瘟的抗体检测上得到了广泛应感度。此方法的缺点是：①对包被抗原的纯度要求用。本文就间接ELISA方法在猪瘟抗体检测上的高，间接法成功的关键在于抗原的纯度，纯度越高，应用做一综述，以期为猪瘟防控提供参考。特异性越强；②待检血清常含有非特异性IgG，血清总IgG中受检的特异性IgG只占小部分，非特异1间接ELISA的基本原理与特点IgG可直接吸附到固相载体上，增加试验的非特异1971年EngvallE等r1。。首先发表了应用酶联性反应

6、。因此，抗原包被后一般用无关蛋白质(如免疫吸附试验(enzyme—linkedimmunosorbentas—BSA、脱脂奶粉)再包被一次(封闭)，以封闭固相载say，ELISA)进行IgG定量测定的论文。随后，体上的空余间隙。ELISA成为继免疫荧光技术和放射性同位素免疫技术之后发展起来的一种新型的免疫酶技术。2间接ELISA在猪瘟抗体检测中的应用ELISA既可用于测定抗原，也可用于测定抗体，常间接ELISA方法是目前检测猪瘟抗体的主要收稿日期：2012—02—24基金项目：山东省自主创新成果转化重大专项计划(2OO8ZHZX1A1lO3)；

7、山东省自然科学基金(ZR2010CQ012)作者简介：李~(1981-)，女(满族)，辽宁开原人，硕士，助理研究员，主要从事动物病毒学研究。*通讯作者李娇等：间接ELISA在猪瘟抗体检测上的应用127方法，利用猪瘟病毒抗原建立间接ELISA方法存在PPV和PRV阳性血清之间不存在交叉反应，用该病毒不易培养，不易纯化，生产成本过高等不利因方法和国外同类试剂盒(CSF—Ab—Kit)同时检测素，且具有潜在的散毒危险，不适合在基层单位及临142份田间血清样品，2种试剂盒的阳性检测率分别床血清调查中使用。利用基因工程方法表达病毒保为83．81和88．7

8、3。该方法通过降低重组蛋白护性抗原基因已逐步得到重视，基因工程抗原具有的诱导温度，促进了E2蛋白以可溶性的形式表达，安全稳定，易于生产纯化、价格低廉等