瘦素对 HepG2细胞中 BSEP 蛋白表达及信号通路的影响.pdf

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1、生国痘理生理盘查ChineseJournalofPathophysiology2015，31(5)：877．881·877·[文章编号]1000—4718(2015l05．0877。05瘦素对HepG2细胞中BSEP蛋白表达及信号通路的影响何静宇一，雷正明，温剑，付文广(泸州医学院附属医院肝胆外科，四川泸州646000；巴中市中心医院肝胆外科，I~t)l』巴中636000)[摘要]目的：探讨瘦素(1eptin)对人肝癌细胞(HepG2)胆盐输出泵(bilesaltexpo~pump，BSEP)蛋白表达及信号通路的

2、影响。方法：体外培养HepG2细胞，不同瘦素浓度(10～、10一和10mol／L)作为刺激因子，分别培养24h、48h和72h后用Westernblotting法检测HepG2细胞的AMPKa、BSEP蛋白表达及AMPKa磷酸化(P．AMPKa)水平；筛选BSEP蛋白表达的最佳培养时间及瘦素浓度点，加入10l~mol／LAMPK阻断剂compoundC进行细胞培养，用Westernblotting法检测BSEP蛋白表达。结果：(1)不同浓度瘦素干预HepG2细胞72h时，随瘦素浓度增高AMPKa蛋白表达量逐渐增高

3、，在瘦素浓度为10mol／L时AMPKa蛋白表达最强(P<0．01)；(2)不同浓度瘦素干预HepG2细胞24h后，AMPKa磷酸化水平与瘦素浓度呈剂量依赖逐渐增强(P<0．01)，相同瘦素浓度组AMPKa磷酸化水平随时间逐渐增加(P<0．01)；(3)不同浓度瘦素干预HepG2细胞24h后，BSEP蛋白表达水平与瘦素浓度呈剂量依赖逐渐增强(P<0．O1)，相同瘦素浓度组BSEP蛋白表达量随时间逐渐增加(P<0．01)；(4)72h测得10mol／L瘦素组和10mol／L瘦素+10tzmol／LcompoundC

4、组BSEP蛋白表达较正常对照组均增加(P<0．01)，compoundC可降低BSEP蛋白的表达(P<0．01)。结论：瘦素可通过“leptin·AMPK—BSEP'’途径促进HepG2细胞BSEP蛋白表达；瘦素可促进HepG2细胞AMPKa蛋白表达及AMPKa磷酸化水平。[关键词]肝内胆管结石病；瘦素；胆盐输出泵；腺苷酸活化蛋白激酶[中图分类号]R730．23；R363．2[文献标志码]Adoi：10．3969／j．issn．1000．4718．2015．05．019EfectsofleptinonBSEPpr

5、oteinexpressionandsignalingpathwayinHepG2cellsHEJing—yu’2，LEIZheng—ming，WENJian，FUWen—guang(DepartmentofHepatobiliarySurgery，AffiliatedHospitalofLuzhouMedicalCollege，Luzhou646000，China；DepartmentofHepatobiliarySurgery，CentralHospitalofBazhongCity，Bazhong63600

6、0，China．E—mail：leizhm@medmail．con．ca)[ABSTRACT]AIM：Toinvestigatetheefectsofleptinontheexpressionofbilesahexportpump(BSEP)andsignalingpathwayinhumanhepatocellularcarcinomacelllineHepG2．METHODS：HepG2cellswereculturedinvitro．Leptinatconcentrationsof10一。10一and10一

7、mol／Lwasusedasastimulatingfactor．Theproteinlevelsofadenosine．monophosphate-activatedproteinkinasealphasubunit(AMPKa)，phosphorylatedAMPKa(p-AMPKa)andBSEPintheHepG2celsat24h．48hand72hweredetectedbyWesternblotting．Theoptimalculturetimeandleptinconcentrationweres

8、elected，andcompoundCatconcentrationof10txmol／Lwasaddedtothisgroup．TheproteinexpressionofBSEPwasdetectedbyWesternblotting．RESULTS：InterventionofHepG2cellswithleptinfor72hincreasedtheprotei