鼠疫耶尔森氏菌Pla蛋白单克隆抗体的制备与鉴定.pdf

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1、ISSNIO07—8738细胞与分子免疫学杂志(ChinJCellMolI—m—ml望olj(985·论著·文章编号：1007—8738(2011)09—0985一O4鼠疫耶尔森氏茵Pla蛋白单克隆抗体的制备与鉴定杜春红，王鹏，张建中，唐雪，宋志忠(云南省地方病防治所，云南大理671000；中国疾病预防控制中心传染病预防控制所，北京102206)体经尿素反复洗涤纯化后免疫BALB／c小鼠，取血清抗体效Preparationandidentificationofmono-价高的小鼠脾细胞与Sp2／0骨髓瘤细胞进行细胞融合，以表clonalant

2、ibodiesagainstPlaproteinof达Pla、表达GST、天然提取Pla3种蛋白为抗原物，采用间接YersiniapestisELISA法筛选阳性杂交瘤细胞，并结合Westernblot对所获取mAb的特异性进行鉴定。结果：经间接ELISA筛选，获得3DUChun—hong，WANGPeng，ZHANGJian一。，株能稳定分泌抗天然Pla蛋白mAb的杂交瘤细胞株，命名为15B8、14H4、19A4，亚类测定分别为IgG2a和IgG1，轻链均TANGXue，SONGZhi-zhong为K链；腹水经间接ELISA法检测效价可达1

3、：10。；WesternYunnanInstituteforEndemicDiseasesControlandPrevention，blot实验证实该3株mAb能特异性识别天然Pla蛋白。结论：Dali671000；NationalInstituteforCommunicableDiseaseCon-成功获得了抗鼠疫耶尔森氏菌天然Pla抗原的特异性mAb，trolandPreventionChineseCenterforDiseaseControlandPreven．为进一步研究Pla蛋白及研发诊断试剂奠定了基础。tion，Beijing10

4、2206，China[关键词]鼠疫耶尔森氏菌；Pla蛋白；单克隆抗体[Abstract]A蹦：Topreparethemonoclonalantibodyof[中图分类号]R392．11[文献标识码]APlawithrecombinantPla(rPla)byhybridomacelltechnolo-gY，whichwilllaythefoundationforrelatedresearchwork．鼠疫(Plague)是一种由鼠疫耶尔森氏菌(YersiniaMETHODS：PurifiedrPlawascollectedbywashing

5、repeat—pestis)引起的自然疫源性疾病，是一种严重危害人类edlywithurea．andBALB／cmicewereimmunizedbyl}1em．文明和社会经济发展的烈性传染病，其传播速度快、HybridomacellswereachievedbySp2／0cellfusionwith病死率高，被列为我国甲类传染病。对其作出快速、mousespleencellsfrOmsuccessfullyimmunizedmice．准确的诊断是鼠疫预防控制的关键。长期以来，以MonoclonaIantibodywasscreenedbyi

6、ndirectELISAand鼠疫菌的荚膜抗原即F1抗原及其抗体为基础建立的WesternblotswithrPla，naturaIcrudePlaandGSTrespec-免疫学诊断技术¨I2，在鼠疫防治工作中发挥了极tively．RESULTS：Threestrainsofhybridomacels(named其重要的作用。但F1抗原缺失菌株的存在、28~(2时15B8，14H4and19A4respectively)whichsecretedstably的不表达或微量表达等原因J，使以F1抗原为惟一themonoclonalantibo

7、dyofPlawereobtained．Theirsub-classeswereIgG2aandIgG1inheavychainsandKchains诊断靶点的诊断方法存在有漏诊的可能。因此构建inlightchains．TheELISAtitersofasciteswere10。respec-除F1抗原外以鼠疫菌其他特异性抗原为基础的免疫tively．ThreeofmonoclonaIantibodycanreactwithnatural学诊断方法十分重要。crudePlatestedbywesternblots．CONCLUSION：Mo

8、ne-由鼠疫菌9500bp质粒(pPCP1)编码的纤溶酶clonaIantibodyofnaturaJPlaofYersiniapestiswereSUC．原激活因