苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒Gp64蛋白的优化表达.pdf

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1、第36卷第1期湖北大学学报(自然科学版)Vo1．36No．12014年1月JournalofHubeiUniversity(NaturalScience)Jan．，2014文章编号：1000—2375(2014)01—0021—04苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒Gp64蛋白的优化表达徐智鹏，张佑红，张楠，翟莉莉，黄双成，陈杏洲(武汉工程大学化工与制药学院，绿色化工过程教育部重点实验室，湖北武汉430074)摘要：研究培养基成份、pH值、接种量、诱导温度、诱导时间及诱导剂浓度等条件对苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒Gp64蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中表达水平的影响．

2、SDS-PAGE电泳分析结果表明：在37℃的LB培养基中培养3h，用终浓度为0．3mmoL／L的IPTG于3O℃诱导5h时表达水平最高．苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒Gp64重组蛋白在大肠杆菌中的优化表达为深度解析其在病毒感染过程中的功能奠定了基础．关键词：苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒；Gp64蛋白；优化表达；大肠杆菌中图分类号：Q71文献标志码：ADOI：10．3969／j．issn．1000—2375．2014．01．004OptimalexpressionofAutographacalifornicamultiplenucle0p0lyhedr0virusGp

3、64proteininE．coliXUZhipeng，ZHANGYouhong，ZHANGNan，ZHAILili，HUANGShuangcheng，CHENXingzhou(KeyLaboratoryforGreenChemicalProcess(WuhanInstituteofTechnology)，MinistryofEducation，SchoolofChemicalEngineeringandPharmacy，WuhanInstituteofTechnology，Wuhan430074，China)Abstract：CapsularGp64prote

4、inisoneofimportantfunctionproteinsinbaculovirusvirionduringinfectiousprocess．Inthisresearch，Autographacalifornicamultiplenucleopolyhedrovirus(AcMNPV)recombinantGp64proteinobtainedinE．coli，andtheeffectofvariousfactorsontheproteinexpressionlevelwasstudied，includedtheelementofmedium，in

5、oculationvolume，culturingandinducingtemperature，thefinalconcentrationofinductorIPTGandinducingtime．Theresultsindicatedthatthehighestexpressionleveloftherecombinantproteincouldbereachedoninducingfor5husinga0．3mmoL／LIPTGconcentrationat30℃．Theculturewascarriedoutfor3hat37℃with10inocula

6、tionvolumeinLBmedium．TheoptimalexpressionoftherecombinantGp64proteinwillprovideabasisforfullyresearchonthefunctionofthegeneduringinfectiousprocess．Keywords：AcMNPV；Gp64protein；optimalexpression；E．coli0引言苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒是杆状病毒科核型多角体病毒属的典型代表，能感染3O多种鳞翅目昆虫，该病毒的基因组是大小为134kb的环状单一双链DNA分子，编码约90种

7、蛋白质．由于昆虫杆状病毒DNA具有大量的非复制必需区，能容许基因缺失或替换，具有较大的可操作性，能够容纳大片段外源DNA的插人，因此可以用作外源基因的表达载体_1]．感染宿主后的核型多角体病毒有两种表型：一种为包涵体病毒(OV)，另一种则为非包涵体病毒(BV)[4]．目前只在BV中发现Gp64蛋白，其集中在杆状病毒BV颗粒的一端，是第三类过滤性的膜融合蛋白，病毒感染的早期和晚期均能表达这个蛋白，是病毒通过吸附、包收稿日期：2013—04—07基金项目：武汉工程大学科学研究基金(10112062)资助作者简介：徐智鹏(1988一)，硕士生；陈杏洲，通信作者，讲师

8、，E-mail：cNs2002@yah