草鱼肠道纤维素降解细菌的分离与鉴定.pdf

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1、第38卷第2期水生生物学报Vo1．38．NO．22014年3月ACTAHYDR0B10L0GICASINICAMar．．2014doi：10．7541／2014．42草鱼肠道纤维素降解细菌的分离与鉴定王微微，2吴山功邹红郑英珍，2程莹寅王桂堂(1．中国科学院水生生物研究所，中国科学院水生生物多样性与保护重点实验室，武汉430072；2．中国科学院大学，北京100049)摘要：为更好地弄清草鱼(Ctenopharyngodonidella)肠道纤维素降解细菌的种类，采用羧甲基纤维素(CMC)作为唯一碳源的选择性培养基，分别从草鱼肠道内容物和肠道黏膜中分离到了40株产纤维素酶细菌。16SrRNA

2、基因序列的分析结果显示，大多数产纤维素酶细菌为气单胞菌属eromonas)的种类，其次为肠杆菌属(Enterobacter)的细菌以及未经分离纯培养的细菌(Unculturedbacterium)。进一步研究细菌产纤维素酶能力发现，纤维素酶活性显著性高于其他菌株的分别是A．veroniiMC2、A．veroniiBC6、肠杆菌科(Enterobacteriaceae)中一种未经分离纯培养的细菌BM3(UnculturedbacteriumBM3)和A．jandaeiHC9。草鱼肠道中简答气单胞菌．jandaei)、类志贺邻单胞菌(Plesiomonasshigelloides)、阴沟肠杆菌(

3、E．cloacae)~A及产气肠杆菌．aerogenes)是被作为产纤维素酶细菌的首次报道。关键词：草鱼；肠道；内容物；黏膜；纤维素降解细菌中图分类号：Q939．1文献标识码：A文章编号：1000．3207(2014)02．0291-07草鱼(Ctenopharyngodon)是全球水产养殖产食物的消化利用率，则对促进草鱼的生长、降低饲量最大的一个品种(邱：11ftp．fao．org／ffstat／summary／料对水环境的污染尤为重要。a．6．pdf)，2009年我国的草鱼养殖产量是4．08x10kg，目前，对草鱼纤维素降解细菌的研究发现，弧占淡水养殖总产量的21．4％t”。草鱼是典型的

4、草食性菌(Vibrio)、气单胞菌eromonas)和芽孢杆菌．动物，以水草为食，Et摄食率可以达到49．9％[2]。高cillus)是草鱼肠道中重要的纤维素降解细菌[12,1，H]。摄食率会导致草鱼的消化不完全，在粪便中甚至可此外，厌氧芽孢杆菌noxybacillus)、明串珠菌以检查到未被消化的完整植物叶片[3]。然而，纤维素(Leuconostoc)、梭菌(Clostridium)、放线菌是植物细胞壁的主要成分。目前的研究表明，细菌、cfDyc)和柠檬酸杆菌(cf6cr)也被推测为真菌、原生动物、昆虫和软体动物等均能够产生纤草鱼肠道中主要的纤维素降解细菌[1。但是，这些维素酶(Cell

5、ulase)t4-8]。植食性动物尤其是高等动物，研究仅分析了草鱼肠道内容物或者肠道黏膜的细自身并不产生纤维素酶[9J，而是依赖其消化道共生菌，尚未有研究将内容物与肠道黏膜的细菌结合生物，如细菌、真菌和原生动物产生的纤维素酶降起来分析。解纤维素[1们。在鱼类的消化酶研究中也发现了其消本研究以草鱼肠道内容物以及肠道黏膜为研究化道内存在纤维素酶，一般认为这些纤维素酶是由对象，旨在通过对草鱼肠道内容物以及黏膜纤维素其消化道内细菌分泌的[1”。因此，筛选高效纤维素降解细菌的综合研究，为草鱼肠道产纤维素酶细菌降解细菌，并将其添加到饲料中提高草鱼对纤维素的研究提供了新思路。实验分离培养了草鱼肠道中收稿日

6、期：2013．O1．04；修订日期：2013．11．22基金项目：国家自然科学基金面上项目(31272706)；国家重点基础研究发展计划项目(2009CB118705)；现代农业产业技术体系建设专项资金(CARS．46—08)资助作者简介：王微微(1984一)，女，河南新乡人；博士研究生；主要从鱼类微生物研究。E-mail：wangwwl114@163．corn通信作者：吴山功，E·mail：wusgz@ihb．ac．cn292水生生物学报38卷产纤维素酶细菌，并测定了其纤维素酶活性，以期ERIC．-PCR扩增产物分析扩增产物经筛选出具有较高纤维素酶活性的细菌，从而为草鱼1．5％的琼脂140

7、V电泳1h后，于凝胶成像分析系统饲料工业，乃至我国水产养殖业的健康发展提供理中观察琼脂糖凝胶电泳谱带，依据PCR产物的条带论基础。分布情况对细菌进行分型。1．4细菌产纤维素酶活性大小的鉴定以及统计分析1材料与方法将纯化的细菌菌落用牙签点种于CMC培养基1．1样品采集平板上，置于恒温培养箱中28℃培养48h，每个菌实验鱼为三龄草鱼，取自湖北省石首市老河长株做三个平行。参照Teather和Wood[18]的方法，