携带ePNP基因的减毒伤寒沙门菌的构建及目的基因在胰腺癌细胞中的表达.pdf

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1、50JOURNALOFSOOCHOWUNIVERSITYMEDICALSCIENCEEDITION2012；32(1)携带ePNP基因的减毒伤寒沙门菌的构建及目的基因在胰腺癌细胞中的表达林勇，刘强，陈卫昌(苏州大学第一医院消化科，江苏苏州215006)摘要：目的构建含有pEGFP—C1．PNP质粒的减毒鼠伤寒沙门菌SL3261菌株，检测其在胰腺癌细胞BxPc一3中的表达。方法PCR扩增得到PNP基因，构建真核表达载体pEGFP—c1．PNP，并进行酶切、PCR和测序鉴定。利用电转化法将重组质粒转入减毒鼠伤寒沙门菌SL3261，

2、进行形态学和表面抗原稳定性检测。含质粒SL3261菌株与BxPc一3细胞体外共培养，利用荧光显微镜观察和RT—PCR检测绿色荧光蛋白的表达和PNP基因的转录。结果目的基因正确连接pEGFP—C1中，并成功转入减毒鼠伤寒沙门菌，感染细胞亦检测到目的基因的表达。结论成功构建了能携带ePNP基因真核表达质粒的SL3261菌株，且该基因能在胰腺癌细胞中正确表达。关键词：减毒鼠伤寒沙门菌；嘌呤核苷磷酸化酶；真核表达载体中图分类号：R378．23文献标识码：A文章编号：1673—0399(2012)01～0050—04Constructi

3、onofattenuatedSalmonellatyphimuriumcontainingPNPgeneandexpressioninpancreaticcancercellsLIN，LIUQiang，CHENWei—Chang(DeptofGastroenterology，theFirstHospitalAfiliatedtoSoochowUniversity，JiangsuSuzhou215006，China)Abstract：0bjectiveTodevelopattenuatedSalmonellatyphimuriu

4、mSL3261harboringrecombi-nantexpressingvectorofpEGFP—C1一PNPandtodetecttheexpressioninpancreaticcancercells．Meth-odsPNPgenewasamplifiedbyPCRclonedintoarecombinanteukaryoticexpressingplasmidpEGFP—C1一ePNPandthenidentifiedbyenzymedigesting，PCR，andsequencinganalysis．pEGFP

5、—C1一PNPvectorwaselectrotransferedtoattenuatedSalmonellatyphimuriumSL3261．ThenthestabilityofthemorphologyandsufaceantigenofattenuatedSalmonellatyphimuniumcontainingplasmidweredetected．MeanwhilethereconstructedSL3261wascoculturedwithBxPc-3cellstodetecttheirinvasion．Fl

6、uorescentmicroscopeobservasionandRT—PCRwasappliedtoobserveGFPandPNPmRNAinthehostcells．ResultsItwasprovedthatPNPgenesegmentswereinsertedintopEGFP--C1correctlyandtransferedintoattenuatedSal--monellatyphimuniumsuccessfully．ConclusionAttenuatedSalmonellatyphimuniumSL326

7、1containingrecombinedeukaryoticexpressingplasmidpEGFP··C1-·PNPwassuccessfullyestablishedandcorrectlyex--pressedinpancreaticcancercells．Keywords：attenuatedSalmonellatyphimurium；purinenucleosidephospho~lase；eukaryoticex—pressingvector收稿日期：2011—10—21作者简介：林勇(1975一)，男，湖北

8、襄阳人，医学硕士，主要从事消化道肿瘤的基础与临床研究。通讯作者：陈卫昌苏州大学学报(医学版)2012；32(1)51胰腺癌是临床常见肿瘤之一，近年来国内发病基因组，利用设计的引物PCR扩增ePNP基因。率呈明显增高趋势，其恶性程度高，进展快。自杀1．5％琼脂糖凝胶电泳检测PC