带状疱疹减毒活疫苗免疫大鼠体外IFN-γ释放检测平台的建立.pdf

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1、·426·免疫学杂志2013年5月第29卷第5期IMMUNOLOGICALJOURNALVo1．29No．5May2013·论著·【文章编~]1000-8861(2013)05-0426-04带状疱疹减毒活疫苗免疫大鼠体外IFN—释放检测平台的建立孙亮，衣岽戎，韩金乐，刘瑛，曾丽文，叶祥忠，夏焕章【摘要】目的探索并建立带状疱疹减毒活疫苗免疫大鼠脾细胞的体外IFN一释放检测方法，并建立评价带状疱疹疫苗免疫应答的检测平台。方法取雌性SD大鼠免疫后4、6、8、12周的血清及脾细胞，分别用gP—ELISA法定量检测血清IgG水

2、平，用双抗体夹心ELISA法定量检测脾细胞体外IFN一释放水平，用SPSS16．0软件分析检测数据。结果大鼠IFN一释放受到脾细胞数、培养时间、刺激物种类的影响，脾细胞数为lxlO个／ml、用带状疱疹疫苗刺激6d的IFN释放量[(6617~1．33)prdn~]达到峰值，协同刺激因子可加速脾细胞体外IFN叫释放速度，刺激2d后IFN释放量【(6016~1．46)ps／m1]达到峰值，与疫苗单独刺激组6d的峰值水平一致。大鼠免疫后血清IgG水平与脾细胞释放的IFN一-y水平随带状疱疹疫苗免疫次数增加的变化趋势一致，皆于第

3、2次免疫后达到峰值期。结论通过对影响带状疱疹疫苗免疫大鼠脾细胞体外IFN释放因素的研究，建立了大鼠脾细胞体外IFN一释放检测平台，且发现协同刺激因子可加速而不额外增加脾细胞体外IFN一^y释放量，为快速检测大鼠脾细胞体外IFN_，y释放量提供了方法；同时验证了gP—ELISA检测的IgG与双抗体夹心检测的IFN一具有一致性。【关键词】带状疱疹减毒活疫苗；协同刺激因子；干扰素一『中图分类号】R392—3【文献标识码】AEstablishmentofanassayforIFN-Treleaseofratsimmunized

4、withliveattenuatedHerpesZostervaccineinvitroSUNLiang，27YIDongrong'2HANJinle，LIUYing3，ZENGLiwen2,YEXiangzhongz，XIAHuanzhangJ．ShenyangPharmaceuticalUniversity,Shenyang110016；2．ChinaBeijingWantaiBiologicalPharmacyEnterpriseCO．，LTD，Beijing102206,China；3．SafetyEvalua

5、tionCenter,ShenyangResearchInstituteofChemicalIndustry,Shewang110016,ChinaCorrespondingAuthor：YEXiangzhong,E—mail：yxzhhb@163．COrn_[Abstract]ExploringVZV——specificIFN-~／releaseinvitroinordertoestablishanassayfordetectingthelevelofimmuneresponseinducedbyherpeszost

6、ervaccine．ImmuneseraandspleenlymphocytesweretakenfromfemaleSDratsatweeks4，6，8，and12post-immunizationforevaluatingIgGlevelandIFN-~releasebyaquantitativegP—ELISAandaquantitativeELISA，respectively．AlldatawereanalyzedbySPSS16．0statisticalsoftware．Theresultsshowedtha

7、ttheappropriateIFN一releasedependsonthedensityofspleencells，culturetimeandstimulustypes．PMA，Ion，IL-2couldsimultaneouslyincreasethespeedofIFN一releasecomparedwithvaccinealone．AndthemaximumreleaseofIFN-~／isabout6000-7000pg／m1．Withtheincreaseoftheimmunizationtimes，Ig

8、GlevelandIFN-~releasereachedaplateauafterthesecondboosterandfollowedaconsistenttendency．Inconclusion，weestablishedanassayfordetectingthelevelofimmuneresponseinducedby