天门冬氨酸氨基转移酶测定.doc

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1、天门冬氨酸氨基转移酶测定（AST）-IFCC法 用途：   用于自动生化分析仪测定血清或血浆中AST活力。AST是常用的肝功能试验和心肌梗塞酶学 指标。方法学原理：  L－天门冬氨酸+a－酮戊二酸        AST   >  草酰乙酸+L－谷氨酸  草酰乙酸+NADH+H＋       MDH   > L－苹果酸+NAD＋ 试剂成分以及浓度：  R1 成  份  浓  度 成  份 浓 度  NADH 0.18mmol/L LDH ≥0.8KU/L  MDH ≥0.6KU/L - -  R2 L－门冬氨酸 200mmol/Lα－酮戊二酸 12mmol/L  使用方法： 

2、 1. 仪器要求：适用于各类自动生化分析仪或半自动生化分析仪。 2. 标本要求：样品为空腹新鲜血清、EDTA或肝素抗凝血浆，溶血会产生干扰。 3. 稳定性与保存：试剂在2～8℃避光保存可稳定一年。单试剂工作液2～8℃避光保存可稳  定一周。 4. 基本参数：  主波长 340nm 标本 5μl 反应方法 速率法 延滞时间  90秒 辅助波长 410nm R1 200μl 反应方法 向 下 读数时间 150秒  反应温度  37℃ R2 100μl 计算因子 3376（340nm/410nm，1cm光径） 4118（340nm/380nm，1cm光径）  5. 测定方法：  

3、        加 入 物 空白管（B）测定管（T）  R1 200μl 200μl 蒸 馏 水 15μl - 标        本 - 15μl 混合，置37℃孵育3～5分钟。 R2 100μl 100μl 混合，置37℃孵育90秒，在主波长340nm/辅助波长410nm下连续监测1～3分钟各管吸光度变化，计算DA/min.       单试剂操作：工作液配制：临用时将R1与R2按2:1混合  加 入 物 空 白 管（B） 测 定 管（T） 工 作 液 300μl 300μl 蒸 馏 水 15μl - 标      本 - 15μl  混合，置37℃孵育90秒，在主波长3

4、40nm/辅助波长410nm下连续监测1～3分钟各管吸光度变化， 计算ΔA/min。  6. 结果计算：    AST活性（U/L）=（DA测定/min－DA空白/min）×3376（340nm/410nm，1cm光径）    AST活性（U/L）=（DA测定/min－DA空白/min）×4118（340nm/380nm，1cm光径） 7. 正常参考值：    男11～49U/L   女11～40U/L  （37℃）     建议各实验室建立自己的正常参考值范围 注意事项：  1. 如果试剂变混浊或试剂空白吸光度值（340nm）小于1.0，试剂已失效。 2. 如果标本中AS

5、T活力＞700U/L（30℃）或＞1000U/L（37℃），需用生理盐水稀释后测定，结果乘以稀释倍数。 3. NADH在340nm的理论摩尔吸光吸数6.22×103，计算因子最好根据实测摩尔吸光系数计  算。 4. 试剂中不含有磷酸吡哆醛。 5. 用底物启动的双试剂可有效消除内源性丙酮酸和GLDH的干扰。 性能特征：  1. 线性范围：700U/L（30℃）；1000U/L（37℃） 2. 准确度：r=0.996  线性回归方程y=1.01x＋0.52（与相同方法商 3. 精密度：批内CV：1.8～3.5%     批间CV：2.2～3.8%