冻干ACYW135群脑膜炎球菌多糖结合疫苗中各群多糖含量检测方法的建立及验证-论文.pdf

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1、·1092·中国生物制品学杂志2014年8月第27卷第8期ChinJBiologicalsAugust2014，Vo1．27No．8技术方法冻干ACYW135群脑膜炎球菌多糖结合疫苗中各群多糖含量检测方法的建立及验证樊会兰，吴凯，张胜祥，陈磊，白梅，包南艳，金栋，陈玉秋，陈瑾，赵志宏，黄镇云南沃森生物技术股份有限公司，云南昆明650106摘要：目的建立冻干ACYW135群脑膜炎球菌多糖结合疫苗中多糖含量的测定方法。方法将10支ACYW135群脑膜炎球菌多糖结合疫苗用注射用水复溶后，分为10份，70l／份，依次加入20mg／ml蛋白酶K溶液0、1、2、

2、3、4、5、6、7、8、9Ixl，降解结合物中载体蛋白，采用火箭免疫电泳法进行多糖含量的测定，确定蛋白酶K最适加量。对建立的方法进行线性范围、定量限度确定以及准确度、精密性及专属性验证。结果20mg／ml蛋白酶K的最适加量为5txl；该方法的线性范围为2．5～40P,g／ml，定量限度为2．5Ixg／ml；3个不同浓度的供试品重复测定3次，A、C、Y、W135群多糖含量的平均回收率分别为99．1％、96．5％、96．5％和97．4％；不同试验人员在不同时间对同一供试品重复测定9次，A、C、Y、W135群多糖含量的CV值分别为3．40％、4．11％、3

3、．35％和4．88％；各群多糖抗原均与其对应的抗血清产生免疫沉淀，而与其他群抗血清不产生免疫沉淀，具有较强的特异性。结论建立了冻干ACYW135群脑膜炎球菌多糖结合疫苗中多糖含量的检测方法，该方法在确定的限度范围内具有较好的准确度、精密性及专属性。关键词：脑膜炎球菌；多糖；结合疫苗；含量测定中图分类号：R378．1+1R392．33文献标识码：A文章编号：1004—5503(2014)08—1092-05Establishmentandverificationofadeterminationmethodforcontentsofpolysacchar

4、ideofvariousgroupsinfreeze-driedgroupsA，C，YandW135mening0c0ccalpolysaccharideconjugatevaccineFANHui—lan，WUKai，ZHANGSheng—xiang，CHENLei，BAIMei，BAONan—yan，JINDong，CHENYu．qiu，CHENJin，ZHAOZhi—hong，HUANGZhenYunnanWosenBiotechnologyCo．Ltd，Kunming650106，YunnanProvince，ChinaCorrespondi

5、ngauthor：HUANGZhen，E—mail：walvaxhuangzhen@126．comAbstract：ObjectiveToestablishamethodfordeterminationofpolysaccharidecontentinfreeze．driedgroupsA，C，YandW135meningococcalpolysaccharideconjugatevaccine．MethodsTencontainersoffreeze—driedgroupsA，C，YandW135meningococcalpolysaccharid

6、econjugatevaccinewerereconstitutedwithwaterforinjection，anddividedintotenaliquots，70txlforeach，thenaddedwith0，1，2，3，4，5，6，7，8and9Ixlof20mg／mlproteaseKrespectivelytodegradethecarrierprotein，anddeterminedforpolysaccharidecontentbyrocketimmunoelectmph0resis，basedonwhichthedosageof

7、proteaseKwasoptimized．Thedevelopedmethodwasdeterminedforlinearrange，quantitativelimitandverifiedforaccuracy，precisionandspecificity．ResultsTheoptimaldosageofproteaseKwas5．Thelinearrangeandquantitativelimitofthedevelopedmethodwere2．5～40P,g／mland2．5txg／mlrespectively．Themeanrecov

8、eryratesofgroupsA，C，YandW135polysaccharideintestsample