医学论文 高效液相色谱

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1、高效液相色谱—串联质谱法测定阿托伐他汀的血药浓度【摘要】目的建立高效液相色谱—串联质谱法测定阿托伐他汀血药浓度的方法。方法采用纯乙腈超声提取，高速离心沉淀蛋白后，以乙腈-乙酸铵缓冲液作为流动相，PhenomenexLuna3μC18(2)100A(150×2.00mm3μm)反相色谱柱，在正离子模式下以电喷雾电离串联质谱进行测定。结果血浆中阿托伐他汀的线性范围为0.1-20ng/mL，定量限为0.1ng/mL。方法回收率为96%～103%，日间、日内RSD均小于6%。结论本方法简单、灵敏、准确，适用于阿托伐他汀人体血药浓度的检测。【关键词】阿托伐他汀血药浓度高

2、效液相色谱—串联质谱法（LC-MS/MS）阿托伐他汀钙片是他汀类血脂调节药，为3-羟基-3-甲基一戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂[1]，它能够降低血浆胆固醇和脂蛋白水平，减少低密度脂蛋白的生成，临床上用于家族性高胆固醇血症、混合性高脂血症等症。因其降脂作用强，副作用小，在高脂血症，特别是高胆固醇血症的治疗中得代写论文到广泛应用[2]。本文建立了高效液相色谱—串联质谱法测定血浆样品中的阿托伐他汀，本法专灵敏度高、重现性好，样品处理方法简便。化学结构见图1。Fig.1StructureofAtorvastatin1实验部分1.1材料和试剂阿托伐他汀标准

3、品购自中国药品生物制品检定所；前处理所用乙腈为分析纯，流动相的乙腈为色谱纯（德国MERCK）；实验用水为超纯水，由Milli-Q系统制作（美国Millipore公司）。1.2液相色谱条件液相色谱仪器为岛津ProminenceUFLC；色谱柱选用PhenomenexLuna3μC18(2)100A(150×2.00mm3μm)；柱温40℃；流动相：乙腈—乙酸铵缓冲液（乙酸铵5mmol／L、甲酸0.5％（v/v））（体积比6：4），等度洗脱；进样量10μL；流速保持在0.3mL/min。1.3质谱条件质谱仪器为美国AB公司的API4000Q-trap；电离方式：E

4、SI（+）；选择多重反应监（MRM）；电离电压5500V，辅助加热温度500℃，气帘气30psi，雾化气3psi，碰撞气：中等，离子源气体1：50psi，离子源气体2：60psi。阿托他汀在ESI（+）[M+H]+的MRM模式下的质谱参数见表1。1.4血浆样品处理精确量取血浆样品0.5mL于10mL离心管中，准确加入2.5mL乙腈，涡旋2min后，超声10min，在4500r/min转速下离心5min。移取上清液用氮气吹干，用1mL的50%乙腈水定容，过0.22μm滤膜，供LC-MS-MS分析。表1阿托伐他汀在ESI（+）[M+H]+的MRM模式下的质谱参数T

5、able1TestparametersforAtorvastatininMRM＊定量离子对(quantitativeionpair)2结果与讨论2.1方法的线性范围、相关性及检出限实验以在血浆空白样品基体中六点添加标准品法制作校正曲线,7点添加水平分别是0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL。按本文方法进行加标回收试验，结果表明，方法此范围内线性相关，相关系数r=0.9998，当信噪比S/N≥10时，定量下限LOQ为0.1ng/mL。2.2方法的精密度和回收率取空白血浆，分别精确加入适量

6、的阿托伐他汀标准溶液，配制成浓度为0.2ng/mL、2ng/mL.10ng/mL的血浆样品各6份，按1.4步骤处理在同日内重复测定5次，并连续5天测定，计算日内、日间的精密度。得到的日内精密度（RSD%）分别为2.62、3.11、1.97，日间精密度分别为3.55、5.65、4.98。阿托伐他汀0.2ng/mL、2ng/mL、10ng/mL三个水平浓度的测定回收率结果见表2。表2空白血浆阿托伐他汀的添加回收率和精密度(n=6)Table2RecoveriesandprecisionsofAtorvastatinatdifferentfortifiedlevel

7、s(n=6)2.3稳定性试验取空白血浆．精确加入适量的阿托伐他汀标准溶液，分别配制成浓度为0.5ng/mL和2ng/mL血浆溶液，按“1.4”项下血浆处理方法操作，分别于0、2、4、8、10h时进行色谱分析，记录峰面积。结果，RSD分别为3.56％和4.14％。表明样品血浆溶液在10h内稳定。图2阿托伐他汀在MRM条件下二种离子的谱图Fig.2TwoionchromatogramsofAtorvastatininMRM2.4实验条件的优化讨论试验中比较了甲醇—乙酸铵缓冲液、乙腈—乙酸铵缓冲液、甲醇—水和乙腈—水[3-6]四种流动相体系，结果表明，以乙腈—乙酸铵

8、缓冲液作为流动相得到的峰型最好，出峰时