二甲双胍体外诱导人肝癌Huh-7细胞凋亡及其作用机制-论文.pdf

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1、·742·中华肿瘤杂志2013年1O月第35卷第10期ChinJOncol，October2013，Vo1．35，No．10．基础研究．二甲双胍体外诱导人肝癌Huh一7细胞凋亡及其作用机制林芬严威文霆吴国洋【摘要】目的探讨二甲双胍对人肝癌Huh-7细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法二甲双胍干预Huh-7细胞后，四甲基偶氮唑蓝(MTI")法检测其对细胞活力及生长抑制的影响；Westernblot检测凋亡相关蛋白及CD133蛋白的变化；流式细胞术检测细胞凋亡及肝癌干细胞相关标志物CD133的表达；无血清悬浮培养观察二甲双胍对肿瘤干细胞球形成的影响；逆转录聚合酶链反应(RT．P

2、CR)检测其对肿瘤干细胞相关基因CD133、B-catenin、ABCG2mRNA表达的影响。以加入与实验组相同的培养液但未给予药物处理的组为对照组。结果MTr检测结果显示，与对照组比较，随着二甲双胍浓度的增高，肝癌Huh-7细胞的增殖率下降，差异均有统计学意义(均P<0．05)。10mmol／L二甲双胍干预48h后肝癌Huh-'／细胞的早期凋亡率为(22．29±0．80)％，对照组的早期凋亡率为(6．704-0．50)％，差异有统计学意义(P<0．05)；10mmol／L二甲双胍干预48h后肝癌Huh-'／细胞的晚期凋亡率为(13．874-1．20)％，对照组的晚期凋亡率为(1．

3、10±0．02)％，差异有统计学意义(P<0．05)。25mmolfL二甲双胍干预48h后细胞的早期凋亡率为(15．28±2．10)％，晚期凋亡率为(25．89±2．30)％，均高于对照组(均P<0．05)。Westernblot检测结果显示，25mmoL／L二甲双胍干预Huh一7细胞48h后，P—Akt、Bcl-2／Bax比值表达下调，PTEN表达上调。随着二甲双胍浓度的增加，CD133蛋白的表达下调。流式细胞仪检测结果显示，25mmoL／L二甲双胍干预Huh-7细胞48h前后，Huh-'／细胞中CD133细胞的表达率分别为(40．7±2．1)％和(14．64-1．85)％(P<

4、0．05)。在低黏附培养皿、无血清培养液的生长环境中，对照组细胞球体积较大，中心厚重，周围清亮，折光度强；1Ommol／L二甲双胍组细胞球体积较小，球体折光度较弱，细胞球数量少于对照组。RT．PCR检测结果显示，肿瘤干细胞相关基因CD133、B—eatenin、ABCG2mRNA表达水平均下调。结论二甲双胍能显著抑制人肝癌Huh-7细胞增殖，促进凋亡。其机制可能与抑制肝癌PI3K／Akt信号通路和CD133肿瘤干细胞的表达有关。【主题词】二甲双胍；肝肿瘤；细胞凋亡；细胞增殖；PI3K／Akt；CD133Meformininducesapoptosisinhepatocellular

5、carcinomaHuh-7cellsinvitroanditsmechanismLINFen，YANWei，WENTing，WUGuo—yang．DepartmentofGeneralSurgeryZhongshanHospital。XiamenUniversity．Xiamen36loo4．ChinaCorrespondingauthor：UGuo—yang，Email：wuguoyangmail@aliyun．com—【Abstract]0bjectivetoinvestigatetheefectsofantidiabeticdrugmetforminonproliferat

6、ionandapoptosisinhumanhepatocellularcarcinomacelllineHuh-7cells．MethodsHuh-7cellsweretreatedwithmetforminatdiferentconcentrations．CellviabilitywasdeterminedbyMT'Fassay．CellapoptosisandCD133expressionrateweredetectedbyflowcytometery(FCM)．ExpressionsofPTEN，Akt，P．Akt，Bcl一2，Baxproteinsintheceilswe

7、remeasuredbyWesternblot．TheefectofmetforminontheheDatoslc，hereformationwasobservedintl1eserum．freesuspensionculture．Reversetranscription．polymerasechainreaction(RT—PCR)wasusedtovalidatetheexpressionlevelsofstemnessmarkergenesCD133，B—eat