质粒转染流程.doc

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1、那么首先要有质粒，然后才能转染。所以第一步就是做质粒：然后继续分解：1.要对质粒有了解，简单的说质粒是一个载体，可以携带目的基因进入细胞；2.你要携带什么基因，根据你的描述，你要携带的是干扰基因，该基因能翻译成RNA后，可以干扰你的目的蛋白翻译，从而起到基因沉默的作用；3.干扰基因的序列是什么，这需要你自己查资料自己设计或者找公司设计；3.一般的质粒是我们成为空载，即没有携带目的基因。那么问题就来了，如何让空载带上干扰基因，也就是所谓的做干扰质粒。可以找公司，也可以自己做。4.如何让做好的质粒进入细胞发挥作用：这个过程叫做转染。转染的方

2、法很多，常用的是脂质体转染，多用Life公司的Lipo2000（现在已经有lipo3000了，据说效果比2000提高了快10倍），这个最方便，属于瞬时转染,，具体方法有说明书；也有用电转的，这个需要特殊的电转设备，比较麻烦，但是转染率高，相应的转染条件也高。4.转染之后第一步要确定干扰效果，可以问你师姐如何解决。5.摸索好条件以后，就可以进行你后续的什么看细胞形态，相关分子表达情况，细胞侵袭等试验了。6.从楼主的语言描述，感觉对质粒构建不是很熟悉，推荐直接找公司构建，当然，如果作为学习，自己也可以构建，但是要有多次失败，时间超长的心理准

3、备。7.如果转染效率不好，推荐病毒包装即用病毒作为载体，楼主可以看一下载体的一些知识。对于：质粒转染需要做好哪些前期准备，如何建立细胞系，在质粒的选择和转染试剂的选择上.细胞系也要根据自己的实验需要，楼主已经选好细胞系了。至于质粒选择，也是要根据你的实验设计，比如你需要这个质粒具有抗某些药物的特点，以便于后期细胞筛选等等，这些都可以和公司商量。