月季组织培养ppt课件.ppt

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1、月季组织培养培养意义实验原理实验步骤1：初代培养2：继代培养问题与讨论常见品种月季属蔷薇科蔷薇属多年生草本植物，每年多次开花，而且香味怡人，在观赏植物中地位很高。另一大优点是分布极广，适应性强，栽培容易。使得月季无愧于“花中皇后”之美誉，古今中外文人墨客咏叹月季的佳作，不胜枚举。但品种比较单一，更新换代缓慢。随着组织培养技术的应用成功培育了大量优质月季组培苗，填补了市场空白，对加速新老品种更新换代，迅速普及名优新品种起到了重要作用。培养意义实验原理细胞的全能性：细胞具有全套遗传物质。能够发育成完整植株的能力。激素调控理论：当细胞分裂素和生长素的比值大时，诱导芽的产生；当比值小时，诱导根

2、的产生；一样时，诱导愈伤组织的形成。实验步骤（一）无菌培养的建立（1）选材选取生长健壮的当年生枝条，用饱满而未萌发的侧芽作为外植体。以枝条中段芽最好，因为接种后，中段芽第5天左右就能萌发，而基部和梢部的芽往往迟至15天才萌发。（2）培养基的配制整个培养过程都可用MS培养基，诱导芽萌发所加的植物激素只需要BA一种即可，每升用0.3～1.Omg。MS培养基MS固体培养基可用于诱导愈伤组织，也可用于胚、茎段、茎尖及花药的培养，其液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显的成功。MS培养基的无机养分的数量和比例比较合适，足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。因此，一般情况下，不用再添加氨基酸、酪

3、蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加成分。和其它培养基的基本成分相比，MS培养基中的硝酸盐、钾和铵的含量高，这是它的显著特点。（3）清洗外植体　　采回的枝条切去叶，再剥去附在茎上的叶柄及皮刺，先整段用洗衣粉水仔细刷洗，再用自来水冲洗，毛巾擦干后，放置在小木板上，用刀切成2～3厘米一段，每段至少一个侧芽，装入消毒过的培养皿，放在超净工作台上。（4）消毒与接种　　在超净工作台上，用饱和漂白粉上清液作表面灭菌25～30分钟，用无菌水涮洗数次，无菌纱布吸干茎段外表水分，按无菌操作要求接种，从芽萌发到芽长到1厘米左右需要2～3周。（5）培养培养温度21℃最好，最高不超过25℃，有昼夜温差，光

4、照10～12小时/天，光强800～1200LX（勒克斯）。继代培养（1）将上述无菌芽从原茎段上切下，转接到MS+BA1-2mg/l+IAA0.1-0.3mg/l或MS+BA1-2mg/l+NAA0.01-0.1mg/l的培养基上，促使嫩茎长出更多的侧芽，原茎段弃去。继代增殖培养基每升用蔗糖30克（2）5周后，所培育的月季成倍的增加。（3）每5～6周做一次继代增殖，继代前先制备好培养基，然后在无菌操作条件下，将月季嫩茎切成1～2节一段，投入新鲜的增殖培养基上，月季小苗就会按几何级数增殖起来，也可以将大苗转入到生根培养基上。（4）壮苗培养①对增殖倍率高的品种，所增殖的嫩茎很细弱，要求进行一

5、次壮苗培养，以取得适合生根和今后移栽的苗子。壮苗培养的培养基为：MS+BA0.3-0.5+NAA0.01-0.1，如果并不特别强调繁殖速度，也可以一直使用这种培养基，以壮苗为主，增殖为辅，使增殖与壮苗合为一步。②培养条件。光照10～12小时/天，光强800～1800LX，温度20～23℃，最高24～26℃。（5）生根与移栽月季嫩芽生长到一定长度时，就应切割下来，转入生根培养基。切下的嫩芽长度以2～3厘米为宜，让幼苗基部伤口愈合，已长出根原基，幼根尚未长出，即出瓶种植。这种方法不会损伤根系，移栽速度快，成活率高。（a）以MS培养基为基础，配方为MS+NAA0.5，此外加入300mg/L活

6、性炭，30g/L蔗糖。插植2厘米以上无根嫩茎，经2周左右出现根原基，幼根尚未长出即出瓶种植。移植操作（b）移栽。幼苗出瓶后，先洗去沾附的琼脂培养基，再种植到粗沙+园田土（1：3）介质中，总的原则是疏松透气，有一定的保水、保肥能力。种植密度2～3厘米×4～6厘米/株，移栽完毕浇透水，并用0.1％的百菌清、多菌灵或甲基托布津等喷雾保苗，能显著提高成活率。（c）移栽后管理。移栽后需保持相对湿度85％以上，在温室、拱棚中移栽，覆好遮荫网，一般成活率都比较高，并注意通风和温度管理。4～6周后，须做好第二次移植，通常植入5厘米×9厘米的塑料杯中，每杯种1苗，再经4～6周，地上、地下部分都充分生长，

7、有些植株还能开花。（d）移栽后植保工作。首次移栽1周后，可少量的追肥，视苗大小，浓度逐渐由0.1％提高到0.3％左右，施用种类有复合肥、尿素、磷酸二氢钾，MS培养液等，通常每7～10天喷一次杀菌剂，如百菌清等保苗，也可结合喷药施肥，以减少管理用工。试管苗第二次移栽后，管理上仍不可放松，须注意除草、施肥、防治病虫害，及时掐去顶芽，尤其是花蕾，以促进侧芽的生长，促使早日壮大。培养中易出现的问题初代培养外植体的褐变：褐变是由于植物组织中的多酚氧化酶被