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《DB13-T 2593-2017 禽腺病毒4型PCR检测方法》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、ICS11.220B43DB13河北省地方标准DB13/T2593—2017禽腺病毒4型PCR检测方法2017-11-22发布2017-12-22实施河北省质量技术监督局发布DB13/T2593—2017前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由河北农业大学提出。本标准起草单位:河北农业大学。本标准主要起草人:袁万哲、王建昌、孙继国、刘聚祥、李丽敏、陈立功、李睿文、张磊、白云、陈赛娟、李杰峰。IDB13/T2593—2017禽腺病毒4型PCR检测方法1范围本标准规定了禽腺病毒4型PCR检测方法的技术要求。本标准适用于检测家禽咽喉拭子、肛拭子,发病禽组织和这些采集
2、样品培养物中的禽腺病毒4型。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2.1DNA脱氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid)2.2EB溴化乙锭(ethidiumbromide)2.3PCR聚合酶链式反应(polymerasechainreaction)2.4dNTP脱氧核苷酸三磷酸(deoxy-ribonucleosidetriphosphate)3试剂或材料包括各种市售病毒核酸提取试剂盒,1.0%琼脂糖凝胶,50×TAE缓冲液,溴化乙锭(EB,10ug/μL)或核酸染料,焦碳酸二乙酯(DEPC)处理的灭菌的双蒸水,DNA分子量标准(100bp),2×TaqMaster
3、Mix或商品化的一步法PCR反应试剂。警示:电泳中用到的EB在操作中应戴手套和口罩。试验中被EB污染的物品要进行无害化处理;DEPC在操作中应在通风条件下进行,使用时戴手套和口罩,不小心沾到皮肤应立即冲洗。3.1病毒核酸提取试剂盒。3.21.0%琼脂糖凝胶,配制方法见附录A中A.1。3.350×TAE缓冲液,配制方法见附录A中A.2。3.4溴化乙锭(EB,10ug/μL)或核酸染料,配制方法见附录A中A.3。3.5焦碳酸二乙酯(DEPC)处理的灭菌的双蒸水,配制方法见附录A中A.4。1DB13/T2593—20173.6DNA分子量标准(100bp):包含100bp、250bp、5
4、00bp、750bp、1000bp、2000bp几种分子量标准。3.72×TaqMasterMix。3.8商品化的一步法PCR反应试剂:含有PCR缓冲液、酶混合物、dNTP混合物、无RNA酶的水等。3.9引物:上游引物与下游引物见附录B中的表B.1。引物浓度为10μmol/L。4仪器设备4.1PCR仪:温度范围4.0℃~99.9℃;样品基座配置至少包括单个0.2mL孔。4.2凝胶成像系统:检测灵敏度DNA≥0.1ng;有效像数1360×1024、10bit、USB2.0。4.3台式低温高速离心机:最高转速16000r/min;容量1.5mL×12。4.4电泳仪:电压50V~120V
5、,电流10mA~800mA,定时0min~999min。4.5电泳槽:耐高温、耐腐蚀、不漏液;缓冲液容量充足。4.6冰箱:具有冷藏功能。4.7微量移液器:单道可调;量程包括0.5~10μL、2~20μL、10~100μL、100~1000μL。4.8水浴锅:温度范围为室温~100℃。5样品5.1阴阳性对照以灭活的禽腺病毒4型鸡胚尿囊液作为阳性对
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