DB21T 1861.2-2010 水产生物种质检验技术规程 扩增片段长度多态性法

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1、ICSB50DB21辽宁省地方标准DB21/T1861.2 —2010水产生物种质检验技术规程扩增片段长度多态性法AFLPproceduretodetectgermplasmforaquaculturespecies2010-12-31发布2011-02-01实施辽宁省质量技术监督局发布前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由辽宁省海洋水产科学研究院提出。本标准归口单位：辽宁省海洋与渔业厅。本标准主要起草人：刘卫东、高祥刚、赫崇波、李云峰、李宏俊、鲍相渤。附录A、B、C均为资料性附录。扩增片段长度多态性法扩增片段长度多态性法1　范围本标准规定了水产生物扩

2、增片段长度多态性分析（AFLP）的原理、试剂、仪器和设备、采样、分析步骤和数据运算方法。本标准适用于水产生物种质检测与鉴定等方面的种质检验工作。2　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T18654.15-2008养殖鱼类种质检验第15部分：RAPD分析3　术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1聚合酶链式反应（PCR）用一对寡核苷酸引物、四种脱氧核糖核苷酸（dNTPs）为原料，在合适的温度、离子条件和耐热DNA聚合酶催化下，在体外人

3、工合成特异的DNA片段的过程。3.2基因型（Genotype）控制某一性状的基因组合。3.3座位（Locus）基因在染色体上所处的特定位置。3.4等位基因（Allele）基因的一种变异体，在二倍体细胞内每个基因有两个等位基因，每个等位基因分别来自于各自的亲本。在一个群体中一个基因可能有许多等位基因。3.5多态性位点百分率(PercentofPolymaorphicLoci，P)表示后代所获得某个等位标记来自于它的父亲（或母亲）的同一个等位标记的可能性。3.6Nei’s基因多样性指数（GeneDiversity，H）随机选择基因间的非同一的概率。3.7遗传距离（GeneticD

4、istance，D）用基因频率的函数表示的群体间遗传差异，它的最适宜的测度是单位长度DNA的核苷酸数或密码子的差数，是用来表示群体或个体之间遗传关系远近的一个量化指标，其值可以从0至无限大。群体或个体间的遗传距离越小，它们之间的亲缘关系越近，反之群体或个体间的遗传距离越大，那么它们之间的亲缘关系将越远。3.8Shannon多样性指数(Shannonindex，I)用来估算群落多样性的高低。3.9聚类分析（ClusterAnalysis）将研究对象分为相对同质的群组（clusters）的统计分析技术。1　原理扩增片段长度多态性法（AmplifiedFragmentLengthP

5、olymorphism，AFLP）的原理是对基因组总DNA酶切后经PCR进行选择性扩增，先将基因组DNA用两种限制性内切酶酶切成