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２８５学校代码：１０２０１２４３４７０８２学号：ＳＯＯＣＨＯＷＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ苏州市獅病■亍病■盼析ｈｏｕ２０１１－２０１３ＥｉｄｅｍｉｏｌｏｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｎｏｒｏｖｉｒｕｓｉｎＳｕｚｐｇ，■．：■－ｔ研究生姓名？￥指导教师姓名—专业名称＾研＠九方ｔｒ向Ｓｉ流行病学医学部公共卫生学院所在院部论文提交２０１７年１１月日期 苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：日期： 苏州大学学位论文使用授权声明、保存和使用学位论文的规定本人完全了解苏州大学关于收集，艮Ｐ：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸一致、质论文的内容相。苏州大学有权向国家图书馆中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社）、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在。年＿月解密后适用本规定非涉密论文口论文作者签名：瓶日期：导师签名－：ｉｏ曰期：＾尊ｆ 苏州市诺如病毒流行病学特征分析中文摘要中文摘要目的：了解苏州市诺如病毒的的流行病学特征，为本地区诺如病毒的预防和控制提供更多的科学依据。方法1.收集2011-2013年苏州大学附属儿童医院住院儿童中符合病毒性腹泻诊断标准的患儿腹泻标本1214份，同时填写腹泻个案流调表。2.对腹泻标本采用荧光定量RT-PCR法检测诺如病毒，并结合调查资料对诺如病毒的感染情况进行分析。采用普通RT-PCR法对诺如病毒阳性标本进行扩增，将阳性产物进行测序并对序列进行基因分型及构建进化树，从分子水平分析诺如病毒GII型的流行趋势，并着重分析GII.4型的流行状况。3.所有资料录入Epidata3.0数据库后，用SPSS18.0软件进行统计处理和分析，P<0.05，认为差异有统计学意义。结果1．苏州市2011-2013年诺如病毒流行病学特征分析（1）2011-2013年诺如病毒平均检出率为22.81%，分年度的检出率分别为28.82%、24.82%、14.75%，检出率呈下降趋势。（2）诺如病毒检出率秋季最高，夏季最低。（3）2011-2013年城市及乡镇检出率均呈下降趋势，园区检出率呈下降趋势。（4）2011-2013年分年龄组中检出率最高为7-12月龄组（30.65%）。男性、女性检出率分别为24.09%、20.59%。男、女性检出率均呈下降趋势。2．苏州市2011-2013年诺如病毒分子流行病学特征分析（1）2011-2013年共获得序列184个，其中GII.4型118个，GII.3型62个，GII.4型检出率呈下降趋势。（2）GII.4型中GII.495/96US型1个，GII.4/2006b型30个，GII.4/NewOrleans型14个，GII.4/Sydney型27个，2012年9月苏州市首次检出GII.4/Sydney型。（3）GII.4型仅在36月龄以下组中被检出，GII.4/2006b型主要在7-12月龄组中被检出，GII.4/Sydney型主要在13-24月龄组中被检出。GII.4型、GII.4/2006bI 中文摘要苏州市诺如病毒流行病学特征分析型、GII.4/Sydney型男女性别比分别为1:0.66、1:0.65、1:0.8。结论1．2011-2013年诺如病毒检出率呈下降趋势。2．GII.4/Sydney型已取代GII.4/2006b成为苏州及周边地区的流行株。关键词：诺如病毒；流行特征；基因型作者：指导老师：II 苏州市诺如病毒流行病学特征分析英文摘要EpidemiologicalcharacteristicsofnorovirusinSuzhou,2011-2013AbstractObjective:ToanalyzetheepidemiologicalcharacteristicsofnorovirusinfectioninSuzhouduring2011and2013.Method:1.During2011and2013,1214diarrheasampleswerecollectedfromhospitalizedchildrencaseswithacuteviraldiarrheaintheChildren'sHospitalofSuzhouUniversity.Theclinicdataandlaboratorymeasurementwererecored.2.ThediarrheasampleswereamplifiedbytheconventionalRT-PCRmethodtodetectthecapsidregionofNV.Allthepositiveproductsweresequencedandanalyzed.Result:1.EpidemiologicaltrendofnorovirusinSuzhoufrom2011to2013(1)Thepositiverateofnoroviruswassignificantlydecreasedfrom2011to2013.(2)ThepositiverateofnorovirusinSuzhouwasthehighestinautumnandthelowestinsummer.(3)Comparedtootherregions,thepositiverateofnoroviruswassignificantlydecreasedinYuanqufrom2011to2013.(4)Thepositiverateattheagegroupof7-12monthwashigherthanothergroups.Thepositiverateinthemalewas24.09%,whilethepositiverateinthefemalewas20.59%.2.MolecularepidemiologicaltrendofnorovirusinSuzhoufrom2011to2013(1)184strainsweresuccessfullysequenced.OnestrainbelongedtoGII.495/96US,76strainsbelongedtoGII.4/2006b,14strainsbelongedtoGII.4/NewOrleans,27strainsbelongedtoGII.4/Sydney,1strainbelongedtoGII.2,62strainsbelongedtoGII.3,2strainsbelongedtoGII.6,and1strainbelongedtoGII.7.(2)GII.4wasdetectedonlylessthan36monthofagegroup,GII.4/2006Bismainlydetectedin7-12monthsgroup,GII.4/Sydneywasmainlydetectedin13-24monthsgroup.III 英文摘要苏州市诺如病毒流行病学特征分析Conclusion:1.Thepositiverateofnoroviruswassignificantlydecreasedfrom2011to2013.2.GII.4/SydneyhasreplacedGII.4/2006basaprevalentstraininSuzhouanditssurroundingareas.Keywords:norovirus;genotype;epidemiccharacteristicsWrittenby:Supervisedby:IV 目录一、前言..........................................................................................................................1二、材料和方法..............................................................................................................3（一）研究对象.......................................................................................................3（二）实验材料.......................................................................................................31.实验试剂.........................................................................................................32.实验仪器.........................................................................................................4（三）实验方法.......................................................................................................41.标本的前处理.................................................................................................42.核酸提取.........................................................................................................43.诺如病毒RT-PCR检测.................................................................................54.琼脂糖凝胶电泳鉴定.....................................................................................95.序列分析.........................................................................................................9三、结果........................................................................................................................10（一）苏州市2011-2013年诺如病毒流行病学特征分析..................................101.概况...............................................................................................................102.季节分布........................................................................................................113.居住区域分布................................................................................................114.性别年龄分布...............................................................................................12（二）苏州市2011-2013年诺如病毒分子流行病学特征分析..........................121.诺如病毒聚合酶区测序情况.......................................................................132.诺如病毒聚合酶区基因分型结果...............................................................133.诺如病毒GII.4流行病学特征.....................................................................14四、讨论........................................................................................................................17（一）苏州市2011-2013年诺如病毒流行病学特征分析..................................17（二）苏州市2011-2013年诺如病毒分子流行病学特征分析..........................18五、结论........................................................................................................................20 六、创新点与局限性....................................................................................................21参考文献........................................................................................................................22文献综述........................................................................................................................25学习期间发表的文章....................................................................................................40常见英文缩略语说明....................................................................................................41致谢............................................................................................................................42 苏州市诺如病毒流行病学特征分析一、前言一、前言腹泻病是儿童的常见病和多发病，是导致发展中国家儿童生长发育障碍和成年人劳动力水平下降的主要因素。据WHO发布的卫生统计报告中显示全世界每年约有20亿腹泻患者，在全球5岁以下儿童死亡原因中，腹泻是仅次于肺炎的病因，[1-3]占15%，在发展中国家腹泻为儿童死亡构成原因的10.5%。在发达国家即使腹泻病的发病数呈下降趋势，但发病率仍处于较高水平。目前至少有25种不同病原微生物会引起腹泻，随着卫生条件的改善和抗生素的应用，使得细菌性腹泻得到了有效控制，而病毒性病原导致的腹泻越来越引起人们的重视。病毒性腹泻最常见的病原体主要包括轮状病毒（RV）、诺如病毒（NV）、札如病毒（SaV）、肠道腺病毒（AdV）、星状病毒（AstV），其中轮状病毒和诺如病毒感染所占比例最大。自轮状病毒疫苗成功研制和应用以来，诺如病毒因无特效药物而更受重视。诺如病毒感染剂量低，所有的年龄组人群都能被感染，非常容易引起暴发。全世界每年约有2亿6700万人感染诺如病毒，在所有的胃肠炎暴发事[4-5]件中50%是由诺如病毒引起的。美国每年有超过2100万人感染诺如病毒，其[6-7]中包含190万门诊病例、40万急诊病例、7.1万住院病例和800人死亡。美国CDC食源性暴发疫情监测数据显示，病因明确的暴发疫情中有33%是由诺如病毒引起的。我国对诺如病毒的研究起步较晚，在相当长的时期没有对其研究的相关报告，直到1995年方肇寅等人首次在河南省急性腹泻门诊收集的标本检出诺如病毒，才[8]证明了我国儿童中也存在由诺如病毒引起的感染。随后在北京、长春、上海、广[9-12]州等地区均发现诺如病毒的存在。诺如病毒根据基因特征分为五个基因组，共31种基因型，其中引起人类病毒性腹泻的是GI和GII型。自1995-1996年诺如病毒首次在美国、欧洲、澳洲出现世界性大流行后，GII.4一直为主要的流行基因亚型，且其基因序列也在不断的进化，每隔2-3年就会出现新的GII.4变异株。既往主要的流行变异株为：GII.4/US95/96(1995-2002年)、GII.4/FarmingtonHills型（2002-2004年）、GII.4/Hunter型（2004-2006年）、GII.4/DenHaag(GII.4/2006a型)及GII.4/2006b型（2006-2009年）、1 一、前言苏州市诺如病毒流行病学特征分析GII.4/NewOrleans型（2009-2012年），GII.4/Sydney型。调查表明全世界80%的诺[13]如病毒感染均是有GII.4型引起。目前轮状病毒已被大多数医院列为腹泻常规检查，但是诺如病毒还未被纳入，所以针对诺如病毒的相关研究还相对较少，且不同地区诺如病毒的流行存在差异。为充分了解苏州地区诺如病毒感染的流行现状及目前主要流行的基因型，本次研究对苏州地区腹泻儿童的粪便标本进行收集并检测，有助于做好对诺如病毒的预防工作。对诺如病毒进行基因测序，将苏州地区现在的流行株与国内进行纵向比较，与世界其他地区进行横向比较，使得人们对诺如病毒了解更充分、更全面。2 苏州市诺如病毒流行病学特征分析二、材料和方法二、材料和方法（一）研究对象1.病毒性腹泻诊断标准纳入标准：(1)大便性状有改变，呈稀便、水样便；（2）每日排便3次或3次以上；（3）大便常规镜检白细胞小于15/HP，未见红细胞。排除标准：（1）药物引起的腹泻；（2）院内感染造成的腹泻。2.标本来源遵循知情自愿的原则，在2011年1月至2013年12月期间，对符合病毒性腹泻诊断标准的苏州大学附属儿童医院住院儿童进行采样，共收集标本1214份，其中男性772例，女性442例，年龄1-60月，平均年龄为11.73月。3.收集方法在患儿入院24小时内收集3-5ml粪便标本，直接放置在清洁、无菌、干燥的容器内后贴好标签，将标本放置-20℃冷冻保存，同时填写腹泻个案流调表。苏州市疾控中心派专人每月定期将上月采集的标本上送至江苏省疾病预防控制中心急传所。（二）实验材料1.实验试剂ViralNucleicAcidExtractionKitⅡ：台湾Geneaid公司诺如病毒一步法试剂盒：德国QIAGEN公司10mMdNTPs：大连TaKaRa公司RNA抑制酶：大连TaKaRa公司DNAMarker：大连TaKaRa公司生物素核酸染料GoldViewⅡ：北京赛百盛生物工程公司琼脂糖：北京华宇泰克生物技术公司Ex-TaqDNA聚合酶：美国PromegaCorporationRRI逆转录酶抑制：宝生物工程有限公司3 二、材料和方法苏州市诺如病毒流行病学特征分析2.实验仪器PCR仪：美国AppliedBiosystem公司涡轮振荡器：德国Eppendorf公司微量高速离心机：德国Eppendorf公司水平电泳仪：美国Bio-Rad公司凝胶成像系统：美国Bio-Rad公司微量加样枪：德国Eppendorf公司（三）实验方法1.标本的前处理（1）在1.5mLEP管上标记标本号（2）在每管中加入900µl的诺如病毒标本稀释液（3）每份粪便标本取100µl加入已标记好的EP管中（4）将剩余的标本留在原容器中，放-20℃冰箱内保存（5）EP管使用漩涡振荡器剧烈震荡3次，每次10s,静止10min,8000rpm离心5min,取上清液进行下一步试验2.核酸提取（1）在实验开始前，在ADBuffer和WashBuffer中分别加入30ml和50ml96-100%的乙醇（2）将200µl10％便悬液加入EP管中，加400µlVBLysisBuffer至已加入便悬液的EP管中，漩涡振荡混匀（3）室温（15～25℃）孵育10min，将VB柱子放入2ml收集管中（4）加450µl已加乙醇的ADBuffer至上述样本裂解物中，漩涡振荡混匀（5）小心地打开VB柱盖子，将600µl溶解混合物移至VB柱子中,注意不要弄湿柱子边缘,盖上盖子，13000rpm离心1min（6）弃去滤过液，仍将柱子放入原收集管中，将剩余裂解物移至VB柱子中，盖上盖子，离心13000rpm1min（7）小心地打开VB柱盖子，弃去包含有滤过液的收集管，将VB柱子放入4 苏州市诺如病毒流行病学特征分析二、材料和方法另一新的收集管中（8）加400µlW1Buffer至VB柱子中，盖上盖子，离心13000rpm30Secs（9）弃去滤过液，仍将柱子放入原收集管中。加600µl已加过乙醇的WashBuffer至VB柱子中，盖上盖子，13000rpm离心30Secs（10）弃去收集管中滤过液。13000rpm，离心空柱子3min（11）将干燥的VB柱放入干净的1.5mlEP管中。加50µlRNase-free水至VB柱中进行洗脱，盖上盖子，室温孵育3min，13000rpm离心1min。病毒DNA进行PCR，或贮存于－20℃或－70℃备用3.诺如病毒RT-PCR检测RT-PCR检测诺如病毒，是针对诺如病毒不同的基因型别采用不同的引物扩增诺如病毒来进行鉴定和分型。RT-PCR两步法是检测诺如病毒衣壳蛋白区，采用引物G1-SKF/G1-SKR和COG2F/G2-SKR,分别扩增诺如病毒的GⅠ和GⅡ分型。RT-PCR一步法是用来检测诺如病毒聚合酶区，引物是P289/P290。检测诺如病毒所用引物如表1所示：表1诺如病毒分型的寡聚核苷酸引物病毒名称扩增区域引物名称极性序列(5’-3’)NV-GICapsidG1-SKF+CTGCCCGAATTYGTAAATGAG1-SKR-CCAACCCARCCATTRTACANV-GIICapsidCoG2F+CARGARBCNATGTTYAGRTGGATGAGG2-SKR-CCRCCNGCATRHCCRTTRTACATNVRPRD289H-TGACGATTTCATCATCACCATA289I-TGACGATTTCATCATCCCCGTA290H+GATTACTCCAGGTGGGACTCCAC290I+GATTACTCCAGGTGGGACTCAAC290J+GATTACTCCAGGTGGGATTCAAC290K+GATTACTCCAGGTGGGATTCCAC（1）RT-PCR两步法RT反应：以提取的病毒RNA核酸为模板，用随机引物进行逆转录，得到病毒的cDNA，反应体系如表2所示，轻微离心后放入PCR仪，反应条件为：55℃1h，5 二、材料和方法苏州市诺如病毒流行病学特征分析99℃5min，4℃保存。表2RT反应体系试剂体积5×FirststrandBuffer2.05µl0.1MDTT0.75µl10mMdNTP0.75µl0.5mg/µlRandomprimer0.75µl50U/µlRNasin0.5µl200U/µlSSIII0.5µlH2O2.2µlRNA7.5µlTotal2.2µlPCR反应：得到病毒cDNA后用诺如病毒的特异性引物G1SKF/G1SKR和COG2F/G2SKR进行基因扩增，引物浓度为33µm，总反应体积为25µl，反应体系如表3所示：表3诺如病毒PCR反应体系试剂体积10mMdNTP0.5µl10×TaqBuffer2.5µlTaq酶0.125µl33µmG1SKF0.2µl33µmG1SKR0.2µl33µmCOG2F0.2µl33µmG2SKR0.2µlH2O18.575µlRT产物2.5µlTotal25µl轻微离心后放入PCR仪扩增，反应条件如表4所示：6 二、材料和方法苏州市诺如病毒流行病学特征分析表4PCR扩增的反应条件温度时间25℃3min25℃30s35Cycles25℃30s25℃1min25℃7min（2）RT-PCR一步法以提取的病毒RNA核酸为模板，用诺如病毒的特异性引物RT-PCR方法：引物289/290，引物终浓度为10µm，总反应体积为50µl，其中RNA2µl，反应体系如表5所示：表5逆转录聚合酶区链反应（RT-PCR）反应体系试剂体积QiagenonestepRT-PCRBuffer5×10µldNTPmix(10mMeach)2µl10µmP2893µl10µmP2903µlQiagenonestepRT-PCREnzymemix2µl5×QSolution10µlRnase-inhibiter0.25µlH2O17.75µlRNA2µlTotal50µl反应参数如表6所示为：表6诺如病毒聚合酶链反应（RT-PCR）扩增条件温度时间50℃32min95℃15min94℃1min40Cycles49℃1min20s72℃1min7 苏州市诺如病毒流行病学特征分析二、材料和方法72℃10min4.琼脂糖凝胶电泳鉴定将扩增产物进行1.5％琼脂糖凝胶电泳，电压150V，用紫外透射仪观察目的条带，并用凝胶成像系统照相，判断PCR的检测结果。5.序列分析将PCR阳性产物送金斯瑞（南京）科技有限公司纯化和测序，从Genank的核酸序列数据库中下载国内外多株NV的核酸序列片段，将下载序列同本研究检测到的NV序列利用MEGA5，用CLUSTALW方法进行序列比对，使用neighbor-joining法构建进化树。实验方法中核酸提取、RT-PCR检测、琼脂糖凝胶电泳鉴定、序列分析均由江苏省疾病预防控制中心急传所相关人员完成。8 苏州市诺如病毒流行病学特征分析9 三、结果苏州市诺如病毒流行病学特征分析三、结果（一）苏州市2011-2013年诺如病毒流行病学特征分析1.概况苏州市2011-2013年共收集病毒性腹泻标本1214份，男性772例，女性442例，男、女性别比为1:0.57；最高月龄为60月龄，最小月龄为1月龄，平均月龄为11.73±9.55；男性平均月龄为11.81±10.12月，女性平均月龄为11.58±8.49月。见表7。表72011-2013年病毒性腹泻概况男性女性年份人数月龄均数人数月龄均数201127511.8512412.81201225111.4516410.54201324611.4515410.54合计77211.8144211.582011-2013年诺如病毒平均检出率为22.81%，分年度的检出率分别为28.82%、224.82%、14.75%。三年诺如病毒检出率呈下降趋势（趋势卡方检验，=23.90，p<0.05）。见图1。图12011-2013年诺如病毒阳性检出率10 苏州市诺如病毒流行病学特征分析三、结果2.季节分布2011-2013年苏州市诺如病毒检出率平均值最高的在9月（44.30%）。有两个流行高峰，第一个高峰在1-4月，检出率在18.33%-29.09%之间，第二个高峰在8-10月，检出率在27.03%-44.30%。其中2011年季节高峰在4月（47.06%），2012年季节高峰在9月（63.49%），2013年季节高峰在1月（31.82%）。2011-2013年四季均可检出诺如病毒阳性，最多在秋季9-11月，为144例（51.99%）；其次为夏季6-8月，为63例（22.74%）；冬季12-2月，为35例（12.64%）；春季3-5月，为35例（12.64%）；夏季最少。不同季节检出率有统计学差异2（=10.98,p<0.05）。见图2。图22011-2013年诺如病毒季节分布情况3.居住区域分布苏州市2011-2013年诺如病毒按现住址为城市及乡镇区分，检出率分别为城市223.70%、乡镇21.49%。统计学比较无显著性差异（=0.81,p=0.37）。城市、乡镇2检出率呈下降趋势（趋势卡方检验，分别为13.01、11.65，p<0.05）。见表8。表82011-2013年诺如病毒阳性检出率按城市与乡镇比较城市乡镇年份人数检出率人数检出率20115327.606229.9520128130.342214.8611 三、结果苏州市诺如病毒流行病学特征分析20133914.392015.50合计17323.7010421.49苏州市2011-2013年诺如病毒按现住址所属区县区分，检出率居前3位的地区分别为张家港市27.66%、新区26.09%、常熟市25%，检出率最低的为太仓市214.29%，各地区诺如病毒检出率统计学比较无显著性差异（=3.52,P=0.94）。园2区检出率呈下降趋势（趋势卡方检验，=7.51，p<0.05），其余地区检出率变化统计学无显著性差异。见表9。表92011-2013年诺如病毒阳性检出率按现住址所属区县比较年份新区吴中相城姑苏吴江常熟张家港昆山园区太仓201123.9126.0324.5329.6322.2234.7831.2534.1533.3325.00201238.0028.3626.3225.5323.4014.2925.0019.3524.320.00201314.2917.4610.9115.5215.9125.0027.2713.897.140.00合计26.0924.1420.6123.2720.4725.0027.6623.1519.8114.294.性别年龄分布苏州市2011-2013年诺如病毒分年龄的检出率前3位分别为：7-12月龄30.65%、13-24月龄19.46%、0-6月龄18.75%，检出率最低的为37-48月龄5%。2诺如病毒各年龄组检出率有统计学差异（=30.50,p<0.05）。苏州市2011-2013年诺如病毒分性别的检出率分别为男24.09%、女20.59%。2诺如病毒检出率统计学比较无显著性差异（=1.87,p=0.17）。男性、女性检出率2均呈下降趋势（趋势卡方检验，分别为15.18、6.52，p<0.05）。见表10。表102011-2013年诺如病毒阳性检出率年龄分布男性女性年份人数检出率人数检出率20118631.272923.3920125923.514426.8320134116.671811.69合计18624.099120.5912 苏州市诺如病毒流行病学特征分析三、结果（二）苏州市2011-2013年诺如病毒分子流行病学特征分析1.诺如病毒聚合酶区测序情况2011-2013年采用荧光定量RT-PCR方法共检测出诺如病毒阳性277例，将这些阳性标本进行普通RT-PCR扩增，扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳后判断PCR检测结果，将PCR阳性产物测序后获得序列。2011年115份PCR阳性产物获得序列67个，2012年103份PCR阳性产物获得序列68个，2013年59份PCR阳性产物获得序列49份，2011-2013年共获得序列184个。2.诺如病毒聚合酶区基因分型结果2011-2013年184个序列中GII.4型有118个，占64.67%，其次为GII.3型，占33.15%，其他型别构成比在0.54-1.09%。2011-2013年GII.4型的构成比分别为68.66%、70.59%、48.98%。GII.4型占所有基因型别比呈下降趋势（趋势卡方检验，2=4.14，p<0.05），其余基因型构成比统计学无显著性差异。见表11。表112011-2013年诺如病毒分年度基因分型结果（聚合酶区）基因型201120122013总计GII.211GII.320202262GII.4464824118GII.622GII.711总计6768491842011年9-11月检出较多GII.4型，2012年9月又再次检出较多GII.4型，但在2013年同期GII.4型检出较少。2011-2013年GII.3型全年均可检出，GII.2型、GII.6型、GII.7型仅有少量检出。图3。13 三、结果苏州市诺如病毒流行病学特征分析图32011-2013年苏州市诺如病毒基因型别时间分布（聚合酶区）3.诺如病毒GII.4流行病学特征在GII.4型中主要检出4个亚型，各亚型占GII.4型的构成比分别为GII.4/2006b型64.41%、GII.4/Sydney型22.88%、GII.4/NewOrleans型11.86%、GII.495/96US型0.85%。见表12。表122011-2013年诺如病毒GII.4型中各亚型分型结果基因型201120122013总计GII.495/96US11GII.4/2006b3243176GII.4/NewOrleans1414GII.4/Sydney52227合计4648241182011-2013年三年的主要流行株均有不同，2011-2012年为GII.4/2006b型，2013年为GII.4/Sydney型。2012年9月苏州市首次检出GII.4/Sydney型。见图4。14 苏州市诺如病毒流行病学特征分析三、结果图42011-2013年苏州市诺如病毒GII.4型中各亚型时间分布（聚合酶区）GII.495/96US型仅在2013年吴江地区检出。GII.4/2006b型在2011-2012年之间在各区县均有检出。GII.4/NewOrleans型仅2011年在新区、吴中区、相城区、姑苏区、吴江区、张家港市、昆山市均有检出，但在2012-2013年未检出。2012年GII.4/Sydney型率先在吴中区、吴江区、昆山市、园区检出，2013年新区、相城区、姑苏区、张家港市也检出GII.4/Sydney型，仅常熟市、太仓市未检出过GII.4/Sydney型。见图5。图52011-2013年苏州市诺如病毒GII.4型中各亚型地区分布（聚合酶区）15 三、结果苏州市诺如病毒流行病学特征分析GII.4型仅在36月龄以下组中被检出，在7-12月龄组检出较多，所占比例为51.69%，其次在13-24月龄组中所占比例为27.97%。GII.4/2006b型主要在7-12月龄组中被检出，GII.4/Sydney型主要在13-24月龄组中被检出。见表13。表132011-2013年诺如病毒GII.4型中各亚型年龄分布（聚合酶区）基因型0-67-1213-2425-3637-4849-60GII.495/96US1-----GII.4/2006b-47184--GII.4/NewOrleans2822--GII.4/Sydney58131--合计861337--GII.4型男性71例，女性47例，男女性别比为1:0.66,；GII.4/2006b型男性46例，女性30例，男女性别比为1:0.65；GII.4/Sydney型男性15例，女性12例，男女性别比为1:0.8。见表14。表142011-2013年诺如病毒GII.4型中各亚型性别分布（聚合酶区）基因型男性女性GII.495/96US10GII.4/2006b4630GII.4/NewOrleans95GII.4/Sydney1512合计714716 苏州市诺如病毒流行病学特征分析四、讨论四、讨论（一）苏州市2011-2013年诺如病毒流行病学特征分析病毒性腹泻最常见的病原体主要包括轮状病毒、诺如病毒、札如病毒、肠道腺病毒、星状病毒。有研究显示葛兰素史克公司生产的Rotarix在美国和芬兰的试[14]验显示对重症轮状病毒腹泻保护效应为85%，对非G1型保护效应为75%。默[15]克公司生产的Rotateq在非洲及亚洲的5个国家的保护率为72.5%。我国兰州生[16]物制品研究所生产的罗特威在接种一剂后保护效果为73.3%。是的重要难点。轮状病毒感染因为轮状病毒疫苗成功应用而得到控制。诺如病毒却因病毒的体外培养、动物模型以及免疫保护机制这三大难题制约了诺如病毒疫苗研究而无特效药物。诺如病毒在早期诊断中，采用电子显微镜来对粪便标本进行检测，但是受限[17-19]于仅在病毒大量排出时才能使用。免疫电镜法虽灵敏度较普通电子显微镜高，[20]但因劳动强度大，技术要求高不能大量推广。联酶免疫吸附测定法（ELISA）因诺如病毒基因组易发生基因重组只能检测到与抗原同源及相近的病毒株，敏感[21]性得不到保证。RT-PCR现在是用来诊断诺如病毒的主要方式。这种方法最早是[22]在1992年由jiang等建立，逐渐又根据不同的毒株设计出不同的引物，可以同时检测不同的毒株，提高检测效率。苏州市2011-2013年诺如病毒检出率为14.75%-28.82%，平均检出率为22.81%，与我国其他检出率大致相等。2011-2013年广州市诺如病毒阳性检出率为[23][24]10.86%，2008-2015年河南省诺如病毒阳性检出率为10.11%，2012-2013年杭[25]州市诺如病毒阳性检出率为17.92%，2011-2013年珠海市诺如病毒阳性检出率[26]为33.13%。本次研究发现诺如病毒检出率最高的为7-12月龄（30.65%），检出率最低的为[27][28]37-48月龄（5%）。流行特征与2011-2013年广州市、2009-2012年重庆市检出率在0-1岁组最高一致。提示7-12月龄的儿童对病原微生物较为敏感，可能由于自身免疫功能尚未完全建立，而来自母体的抗体水平已基本消失，导致抵抗力较弱。17 四、讨论苏州市诺如病毒流行病学特征分析诺如病毒引起的腹泻在全年均可发生，检出率平均值最高的在9月（44.30%），有两个流行高峰，分别为1-4月（18.33%-29.09%）及8-10月（27.03%-44.30%）,8-10月的流行高峰较1-4月的流行高峰稍高。流行特征与2011-2014年上海浦东新区一[29][30][31]致，与2010-2011年深圳地区的3-7月略有不同，比2011-2012年济南地区的9-11月稍早。可能与济南和深圳都与苏州地区较远，上海与苏州地区较近，环境气候等更加相近，使得苏州的研究结果与上海接近，与济南和深圳的研究结果略有差异。综合来看2011-2013年这三年中检出率峰值的4月、9月及1月均在季节交替，温差较大，可能使诺如病毒发病的风险增加。（二）苏州市2011-2013年诺如病毒分子流行病学特征分析诺如病毒根据基因特征分为五个基因组，其中引起人类病毒性腹泻的是GI和GII型。GI型和GII型又可分为14个及17个基因型。多年的研究表明诺如病毒基因组极易发生重组变异，推动了诺如病毒的进化。从20世纪90年代开始每隔2-3年就会出现新的变异株，导致了局部甚至全球范围内的暴发流行。1995-1996年在美国、欧洲、澳洲的出现GII.495/96US型,2002年出现的GII.4/FarmingtonHills型,2004年在澳洲出现的GII.4/Hunter型,2006年在英国、新西兰及澳洲发现的GII.4/DenHaag(GII.4/2006a型)及GII.4/2006b型,2010年在亚洲地区开始流行起来GII.4/NewOrleans型，2012年开始出现GII.4/Sydney型。本研究对诺如病毒的分型主要针对聚合酶区进行分型，未检测出GI型，检测出GII型184例，其中GII.2型1例，GII.3型61例，GII.4型118例，GII.6型2例，GII.7型2例。GII.4型为主要检出型别，在检出毒株中占64.67%，与2010-2011[24][25]年深圳市79.31%、2011-2012年济南市61.25%相当。GII.3型全年均可检出。GII.2型、GII.6型、GII.7型虽仅有极少量检出，但是说明这几种基因型仍在流行。1995年至今全球的诺如病毒暴发疫情中85%是由GII.4型引起的。本研究发现GII.4型在检出毒株中占64.67%，所占比例较大，所以对诺如病毒GII.4型阳性感染病例进行流行病学特征分析。在GII.4型中主要检出4个亚型，GII.4/2006b型76例（64.41%）、GII.4/Sydney型27例（22.88%）、GII.4/NewOrleans型14例（11.86%）、GII.495/96US型1例（0.85%）。2012年9月苏州市首次检出GII.4/Sydney型，率先在吴中区、吴江区、昆山市、园区检出，至2013年12月仅18 苏州市诺如病毒流行病学特征分析四、讨论常熟市、太仓市未检出过GII.4/Sydney型。可能检测总数较少，这两个地区的GII.4/Sydney型未被检测到。2011年GII.4/NewOrleans型在超过半数的区县均有检出，但在2012-2013年未在任一地区检出。GII.4/NewOrleans型于2009年10月首次在美国被检测到，2009-2011年该型别已经取代GII.4/2006b型成为全球流行优势株，但是在苏州地区该型别并未取代GII.4/2006b型成为本地优势株，可能由于苏州地区未发生过同源GII.4/2006a型的流行。GII.4型仅在36月龄以下组中被检出，在7-12月龄组检出较多。GII.4/2006b型主要在7-12月龄组中被检出，GII.4/Sydney型主要在13-24月龄组中被检出。2011-2013年每年的主要流行株均有不同，2011-2012年为GII.4/2006b型，2013年为GII.4/Sydney型。与2011-2013年珠海市、上海市情况均一致。2009-2011年上海地区的优势毒株为GII.4/2006b[32]型，2012年9月上海市也已经出现GII.4/Sydney型，2012年10-12月就开始进行流行。2013年1月后就未曾再检出GII.4/2006b型，GII.4/Sydney型替代GII.4/2006b型成为流行优势株。2012年1-9月我国诺如暴发疫情中主要流行株为GII.4/2006b，其次为GII.3型和GII.4/NewOrleans型。GII.4/Sydney型于2012年3月在澳大利亚的实验室被[33]分离出来，该毒株与之前的GII.4/Apeldoom型和GII.4/NewOrleans型来源相同，[34-35]但是GII.4/Sydney在P2区的主要抗原决定簇发生了氨基酸变异，可能造成该型别容易造成暴发和流行的原因。付建光研究显示2012-2013年的江苏省的多起诺如暴发疫情中GII.4/Sydney型占84.44%，GII.3型占15.56%，研究表明在散发和[36]暴发中GII.4/Sydney型均占较大比例。提示GII.4/Sydney型已取代GII.4/2006b成为苏州及周边地区的流行株，应该作为监测的重点毒株。19 苏州市诺如病毒流行病学特征分析五、结论1.2011-2013年诺如病毒检出率呈下降趋势。2.GII.4/Sydney型已取代GII.4/2006b成为苏州及周边地区的流行株。20 苏州市诺如病毒流行病学特征分析六、创新点与局限性1.只能对苏州大学附属儿童医院的住院儿童进行采样，未能包括门诊就诊儿童。2.并且因为未能及时与医院采样人员进行沟通联系，使得2013年10月未收到病毒性腹泻标本，可能影响到流行高峰的判断。3.苏州地区关于诺如病毒的研究还仅限于儿童，缺少成人的诺如病毒感染的相关资料，有待于开展成人腹泻感染的现状研究，更好地提供全人群的数据资料，为诺如病毒疫情的防控措施制定提供有力的支撑。21 参考文献苏州市诺如病毒流行病学特征分析参考文献[1]KentAJ,BanksMR.Pharmacologicalmanagementofdiarrhea.[J].GastroenterologyClinicsofNorthAmerica,2010,39(3):495-507.[2]BlackRobertE,CousensSimon,JohnsonHopeL,etal.Global,regional,andnationalcausesofchildmortalityin2008:asystematicanalysis.[J].TheLancet,2010,375(9730):1969-1987.[3]WalkerCL,AryeeMJ,Boschi-PintoC,etal.Estimatingdiarrheamortalityamongyoungchildreninlowandmiddleincomecountries[J].PlosOne,2012,7(1):e29151.[4]BillgrenM,ChristensonB,HedlundKO,etal.EpidemiologyofNorwalk-likeHumanCalicivirusesinHospitalOutbreaksofAcuteGastroenteritisintheStockholmAreain1996[J].JournalofInfection,2002,44(1):26-32.[5]WiddowsonMA,SulkaA,BulensSN,etal..Norovirusandfoodbornedisease,UnitedStates,1991-2000[J].EmergingInfectiousDiseases,2005,11(1):95-102.[6]ScallanE,GriffinPM,AnguloFJ,etal.FoodborneillnessacquiredintheUnitedStates--unspecifiedagents.[J].EmergingInfectiousDiseases,2011,17(7):1339-40.[7]HoffmannS,BatzMB,JrMJ.Annualcostofillnessandquality-adjustedlifeyearlossesintheUnitedStatesdueto14foodbornepathogens.[J].JournalofFoodProtection,2012,75(7):1292.[8]方肇寅,温乐英,晋圣瑾,等.在我国腹泻患儿中发现诺瓦克样病霉感染[J].病毒学报,1995(3):215-219.[9]陈冬梅,张又,钱渊,等.北京地区婴幼儿人类杯状病毒感染状况及型别分析[J].中华儿科杂志,2002,40(7):398-401.[10]谢华萍,方肇寅,王光,等.长春市儿童医院1998～2001年婴幼儿杯状病毒腹泻流行病学研究[J].病毒学报,2002,18(4):332-336.[11]徐锦,孙家娥,丁韵珍,等.2001至2005年上海部分地区腹泻住院患儿诺若病毒分子临床流行病学研究[J].中国循证儿科杂志,2008,3(5):340-344.[12]刘翼,戴迎春,姚英民,等.广州市某医院儿童秋冬季腹泻诺瓦克样病毒感染的分子流行病学研究[J].中华流行病学杂志,2005,26(7):525-528.22 苏州市诺如病毒流行病学特征分析参考文献[13]BullRA,John-SebastianE,RawlinsonWD,etal.Correction:RapidEvolutionofPandemicNorovirusesoftheGII.4Lineage[J].PlosPathogens,2010,6(3):e1000831.[14]DeVB,VesikariT,LinharesAC,etal.Arotavirusvaccineforprophylaxisofinfantsagainstrotavirusgastroenteritis[J].PediatricInfectiousDiseaseJournal,2004,23(10Suppl):179-82.[15]BreimanRF,ZamanK,ArmahG,etal.Analysesofhealthoutcomesfromthe5sitesparticipatingintheAfricaandAsiaclinicalefficacytrialsoftheoralpentavalentrotavirusvaccine[J].Vaccine,2012,30(9):A24-A29.[16]FuC,WangM,LiangJ,etal.EffectivenessofLanzhoulambrotavirusvaccineagainstrotavirusgastroenteritisrequiringhospitalization:amatchedcase-controlstudy.[J].Vaccine,2007,25(52):8756.[17]AtmarRL,EstesMK.Diagnosisofnoncultivatablegastroenteritisviruses,thehumancaliciviruses[J].ClinicalMicrobiologyReviews,2001,14(1):15-37.[18]VinjéJ,HamidjajaRA,SobseyMD.DevelopmentandapplicationofacapsidVP1(regionD)basedreversetranscriptionPCRassayforgenotypingofgenogroupIandIInoroviruses[J].JournalofVirologicalMethods,2004,116(2):109.[19]WrightPJ,GunesekereIC,DoultreeJC,etal.Smallround‐structured(Norwalk‐like)virusesandclassicalhumancalicivirusesinSoutheasternAustralia[J].JournalofMedicalVirology,1998,55(4):312.[20]LinYP,NicholasK,BallFR,etal.DetectionofNorwalk-likevirusandspecificantibodybyimmune-electronmicroscopywithcolloidalgoldimmunecomplexes[J].JournalofVirologicalMethods,1991,35(3):237-253.[21]赵玉然.诺如病毒衣壳蛋白的原核表达与抗血清的制备[D].中国海洋大学,2008.[22]XiJN,GrahamDY,WangKN,etal.Norwalkvirusgenomecloningandcharacterization[J].Science,1990,250(4987):1580-3.[23]陈惠芳.2012-2013年广州市哨点医院婴幼儿病毒性腹泻的分子流行病学研究[D].南方医科大学,2014.[24]赵嘉咏,申晓靖,张白帆,等.河南省2008年至2015年5岁以下儿童病毒性腹泻病原谱及流行病学分析[J].中华传染病杂志,2016,34(12):738-742.[25]赵雪琴,寿钧,张睿.2012年-2013年杭州地区婴幼儿病毒性腹泻监测结果分析23 参考文献苏州市诺如病毒流行病学特征分析[J].中国卫生检验杂志,2014(22):3301-3303.[26]林毅雄,阮锋,魏泉德,张丽荣.2011―2013年珠海市婴幼儿诺如病毒感染分子流行病学研究[J].华南预防医学,2016,(04):344-347.[27]洪展桐,徐霖,钟慧玲,等.2011-2013年广州地区腹泻病毒的病原学研究[J].热带医学杂志,2015,(12):1679-1682[28]乔英琴.2014年重庆地区儿童诺如病毒腹泻分子流行病学研究[D].重庆医科大学,2015.[29]潘丽峰,刘青,刘丹,等.上海市浦东新区2011-2014年诺如病毒检测情况分析[J].中国病毒病杂志,2015,(03):212-216.[30]吴微.2010-2011年深圳市诺如病毒的分子流行病学研究[D].华中科技大学,2013.[31]赛林涛.济南成人诺如病毒感染及儿童轮状与诺如病毒感染特征比较的研究[D].山东大学,2014.[32]姚玮蕾,蔡洁皓,王相诗,等.上海地区2009至2011年儿童诺如病毒腹泻病的监测研究[J].中华儿科杂志,2014,52(5):339-344.[33]CentersforDiseaseControlandPrevent(CDC).Notesfromthefield:emergenceofnewnorovirusstrainGII.4Sydney-UnitedStates,2012[J].MMWR,2013,25(62):55.[34]VanBJ,AmbertbalayK,BotteldoornN,etal.IndicationsforworldwideincreasednorovirusactivityassociatedwithemergenceofanewvariantofgenotypeII.4,late2012.[J].Eurosurveillance:bulletinEuropéensurlesmaladiestransmissibles=Europeancommunicablediseasebulletin,2013,18(1):8-9.[35]BennettS,MacleanA,MillerRS,etal.IncreasednorovirusactivityinScotlandin2012isassociatedwiththeemergenceofanewnorovirusGII.4variant.[J].2013,18(2):22-23.[36]付建光,艾静,靳淼等.江苏省近期急性胃肠炎暴发中诺如病毒分子特征分析[J].中华流行病学杂志,2013,34(8):808-811.24 苏州市诺如病毒流行病学特征分析文献综述文献综述病毒性腹泻苏州市疾病预防控制中心刘成综述苏州大学公共卫生学院董晨审校腹泻，是患者消化道内水分和电解质的积聚和排出，临床表现为便次增多及粪便稀释度降低，排便超过3次/日或排便量>（200-300）g/d。儿童急性腹泻病是一组多病因、多因素引起的以腹泻为主要症状的消化道疾病，在婴幼儿中发病[1]率较高，是造成婴幼儿生长发育障碍、营养不良的重要原因之一。世界卫生组织(WHO)将腹泻病分为感染性腹泻和非感染性腹泻，其中约80%腹泻病属于感染性[2]腹泻。感染性腹泻即由细菌、病毒、原虫等多种病原体引起，以腹泻为主要症状，广泛流行于全世界的肠道传染病，是儿童最常见的疾病之一，也是导致婴幼儿死[3,4]亡的重要病因。《2013年世界卫生报告》指出，发展中国家儿童感染性腹泻死[5]亡人数达156.6万人，病死率为15.2%，位居死因顺位第三位。在感染性腹泻[6]中，细菌和寄生虫感染导致的腹泻目前在一定程度已得到了有效的控制，而病毒感染引起的腹泻尚无有效的治疗方法以及特效药物，日益受到人们的关注和重视。病毒性腹泻，又称为病毒性胃肠炎，是一组由多种病毒引起的急性肠道传染病，主要通过粪-口途径传播，易感人群为婴幼儿，成人也可发病，其临床特点主要表现为腹痛、腹泻、恶心、呕吐，排水样便或稀便，严重者有发热及全身不适症状。病毒性腹泻最常见的病原体主要包括人轮状病毒（HumanRatavirus,HRV）、人杯状病毒（HumanCalicivirus,HuCV）、肠道腺病毒（EntericAdenovirus,EAdV）和星状病毒（Astrovirus,AstV）。病毒性腹泻是影响婴幼儿生长发育及健康状况的重要因素之一。我国病毒性腹泻的研究、监测和控制工作起步较晚，缺乏相关的系统性研究。1.轮状病毒性腹泻1.1轮状病毒的病原学轮状病毒属呼肠孤病毒科轮状病毒属，于1973年由澳大利亚的Bishop首次25 文献综述苏州市诺如病毒流行病学特征分析发现。完整的轮状病毒为球形，无包膜，平均直径约70nm左右，由外层、中间层和内部核心构成，有宽壳盖、短幅和薄边的双股RNA病毒。病毒体中心为直径36-45nm的致密核心，含病毒核酸，外有双层多肽衣壳，呈轮缘状围绕内层，内层衣壳子粒在边缘部呈放射状排列，形似车轮辐条，故称为轮状病毒。轮状病毒根据其基因结构和抗原性可分为A-G7个组，A组、B组、C组可引起人类和[7]动物共同感染，D组、E组、F组和G组主要引起动物感染。在感染人类的轮状病毒中，A组轮状病毒主要感染婴幼儿，引起以严重水样腹泻为特点的腹泻，因此，A组轮状病毒是目前病毒性腹泻预防控制工作的重点；B组轮状病毒在我[8]国于1983年由洪涛首次发现，主要侵犯青壮年，可引起暴发流行；C组轮状病毒仅在青少年中偶发。轮状病毒共有11个节段的基因，编码6种结构蛋白（VP1、VP4、VP6、VP7）和6种非结构蛋白（NSP1NSP6），其中基因4和基因7分别编码能够产生保护性中和抗体的中和抗原VP4和VP7，VP4和VP7是中和抗体的靶点，也是研制疫苗的关键。轮状病毒可根据VP4和VP7的抗原特性分为G血清型和P血清型。VP4决定P血清型，VP7决定G血清型，由G血清型和P血清型组成的基因分型被广泛应用。迄今为止，G血清型至少有15种，同时近年来全世界报道的非流行株还有[9]增多的趋势，美国和爱尔兰等地区发现了G9血清型，巴西发现了G5、G8和G10血清型，泰国发现了G12血清型。在目前已知的G血清型中，有10个血清型可以感染人类，分别为G1、G6、G8、G9、G10和G12，其中有流行病学意义的是G1、G2、G3和G4四种血清型。目前已知的轮状病毒P血清型有26个，有11个血清型可感染人类，常见得有P4、P6和P8。世界上最常见的P血清型为P4和P8两种血清型，占全部P血清型的84%，中国最常见的P血清型也是P4和P8。P6血清型被认为是天然减毒株，既往在全球范围内并不常见，最初是从无症状腹泻新生儿体内检测到的，然而近年来相关研究显示，在全球范围[10]内，P6血清型已经逐步成为一种较为常见的毒株类型。不同国家和不同时间，[11]其血清型分布也存在差异。中国从1982年有了轮状病毒分型资料以来，不同[12]地区、不同年代报道的轮状病毒流行株也不同。在我国，重庆和长春等地G血清型流行株已经从G1转变为G3，而在福建和广东等地区则以G1P8为主要流行株。感染人类的轮状病毒均包含G血清型和P血清型，在G-P组合型中26 苏州市诺如病毒流行病学特征分析文献综述[13]G4-P8、G3-P8、G2-P4以及G1-P8最为常见。1.2轮状病毒性腹泻的流行现状轮状病毒是引起病毒性腹泻的最常见的病原体，几乎每个儿童在5岁以前都[14]感染过轮状病毒。在全球范围内，每年约有14亿婴幼儿因感染轮状病毒而发[15]生腹泻，其中240万人住院，52.7万人因此死亡。在我国，因腹泻入院的5[16]岁以下儿童中有47.8%感染了轮状病毒，每年大约有2.7万名5岁以下儿童[17]死于轮状病毒感染导致的病毒性腹泻。因此，轮状病毒引起了全世界的普遍关注，是目前病毒性腹泻的几种病原体中研究最深入的一种病毒。中国自1978年[18]首次证实轮状病毒存在以来，对轮状病毒展开了许多相关研究，并从1998年开始与WHO和国际疫苗研究所合作，建立了以哨点医院为基础的5岁以下儿童轮状病毒腹泻监测网，对轮状病毒展开了连续和系统的监测。HRV主要通过粪-口途径传播，轮状病毒性腹泻患者、隐性感染者以及带病毒者、急性期患者都是轮状病毒的传染源。近年来，一些流行病学资料和临床研究报告已证实轮状病毒也可通过呼吸道传播。轮状病毒主要感染婴幼儿，以6~24月龄的婴幼儿为主，进入人体的轮状病毒会侵犯小肠上皮细胞，从而造成细胞损伤，引起腹泻。在温带国家中，轮状病毒性腹泻具有明显的季节性，不同地区的高峰[19,20]季节略有差异，多见于秋冬季。中国的轮状病毒性腹泻流行季节也因地区不同而略有差异，但是主要流行高峰一般都是从10月-次年2月。气候变化突然或变化过快是影响HRV流行高峰的因素，这是因为轮状病毒性腹泻与寒冷、干燥[21]和降水量少相关。1.3轮状病毒性腹泻的临床特点轮状病毒主要侵犯小肠绒毛上皮细胞，病变部位主要为十二指肠及空肠，使上皮细胞脱落，代之以缺乏消化酶的鳞形或方形上皮细胞。因此，正常肠粘膜上存在的绒毛酶如麦芽糖酶、蔗糖酶、乳糖酶均减少，导致吸收功能障碍。由于乳糖及其它双糖不能被消化吸收而滞留在肠内，造成肠粘膜与肠腔渗透压的改变，使液体进入肠腔而造成渗透性腹泻。易感者受到轮状病毒感染时，在症状发生前大约会有2-3天的潜伏期，最短潜伏期为数小时，最长可达一周。感染者起病急，病程一般为5-7天，临床症状主要有恶心、呕吐、腹痛、腹泻、发热等急性胃肠炎表现，腹泻常呈渗透性腹泻，粪便多呈水样便，无黏液和脓血，排便次数约5-1027 文献综述苏州市诺如病毒流行病学特征分析次/天，严重者可达到20次/天。另外还可伴有全身乏力、头晕、头痛等症状，严重者可出现酸碱中毒及脱水症状。1.4轮状病毒性腹泻的防治目前，尚缺乏快速有效的抗病毒药物治疗轮状病毒性腹泻，主要是对症进行补液等治疗，而对症治疗不能有效降低轮状病毒性腹泻的病死率。因此，轮状病毒性腹泻的预防就显得愈加重要。免疫是预防和控制轮状病毒性腹泻的有效措施，无论在发展中国家还是发达国家，疫苗免疫都可有效预防轮状病毒的感染和减少重症轮状病毒性腹泻的发生。轮状病毒疫苗有以下几种：第一，减毒活疫苗。为了与天然感染途径一致，目前研制的轮状病毒疫苗都是口服疫苗，这种疫苗可通过多次给予减毒活疫苗刺激免疫系统，诱导机体产生明显的轮状病毒保护作用，而不引起重症腹泻。第二，轮状病毒亚单位疫苗。目前制备亚单位疫苗最常用的方法是利用基因工程技术表达相应的病毒的亚单位成分，作为一种免疫机体。第三，DNA疫苗和微囊化疫苗。近年来，轮状病毒DNA疫苗和微囊化疫苗的研究取得了一定的成就。DNA疫苗可在某些系统表达病毒蛋白产生保护性免疫反应，而微囊化DNA疫苗综合了DNA疫苗和微囊化疫苗的优点，为DNA疫苗的给药方式开创了新的途径。第四，绿色基因功能疫苗，这是一种新型的正在研制中的疫苗，这类疫苗的研制成功将为轮状病毒疫苗的发展探索一条新的道路。2.杯状病毒性腹泻人杯状病毒是世界范围内的重要病原体，其检出率仅次于轮状病毒，位居病毒性腹泻病原体第二位。1998年国际病毒分类委员会批准，将杯状病毒科分为四个属，分别是：Lagovirus，以兔出血病病毒为代表；诺如样病毒（曾成为诺瓦克样病毒），以诺如病毒（Norwalkvirus，NV）为代表；扎幌样病毒，以札如病毒(Sapporovirus，SV)为代表；Vesivirus病毒，以猪水泡疹病毒（Swinevesicularexanthemvirus）为代表。其中，Lagovirus和Vesivirus主要感染动物，而诺如病毒和扎如病毒则主要感染人类，二者合称为人类杯状病毒（HuCV）。诺如病毒由Kapikian于1972年首次通过免疫电镜法从美国俄亥俄州诺瓦克城暴发的急性胃肠炎患者粪便标本中提纯并分离出来，当时被命名为诺瓦克样病毒，在2002年8月的第八届国际病毒委员会上将其命名为诺如病毒。SVs与诺如病毒同属杯状病毒科，1997年在日本札幌市的一起孤儿院腹泻暴发标本中28 苏州市诺如病毒流行病学特征分析文献综述[22]首次发现其病毒株原型，故曾命名为札幌病毒。随后英国、美国、澳大利亚、加拿大、瑞典、荷兰、西班牙、南非等国家也相继检测到类似形态病毒，多以发现时间或发现地命名，如Houston/86、Manchester/93、Houston/90等，最后将其统称为札慢样病毒(SLVs)。由于这些病毒均呈圆形，表面光滑，无包膜，故也被称作小圆状结构病毒(smallroundstructuredviruses,SRSAVs)。2.1杯状病毒的病原学诺如病毒为单股正链RNA病毒，全长约7.7kb，有3个开放阅读框(OpenReadingFrames,ORFs)，两端是5’和3’非翻译区(Untranslatedregion,UTR)，3’末端有多聚腺苷酸尾(PolyA)。第一个开放阅读框(ORF1)编码病毒的非结构蛋白。第二开放阅读框(ORF2)编码病毒的主要结构蛋白，即衣壳蛋白(VP1)，该衣壳蛋白用于构建病毒的衣壳。诺如病毒衣壳是病毒识别宿主受体感染机体的始发部位，也是病毒接触外部环境的一种必需结构。诺如病毒衣壳由180个衣壳蛋白单体聚合而成。每个衣壳蛋白可根据其蛋白在衣壳中的位置分为两个主要区域：壳区(Shelldomam,S区)和突出区(Protrudingdomain,P区)，这两个区域之间由8个氨基酸组成的铰链区连接。S区是构成衣壳的必要成分，P区构成病毒衣壳的最外层。第三开放阅读框(ORF3)编码一个次要结构蛋白(VP2)。札如病毒基因组也是单股正链RNA，其直径约为26-35nm。札如病毒基因中有2-3个开放阅读框，其中GII型基因组只包含2个开放阅读框，而GV、GI、GIV型基因组则有3个开放阅读框。在病毒的开放阅读框中ORF1编码非结构蛋白和衣壳蛋白；ORF2编码一种基本小蛋白，这种基本小蛋白与诺如病毒的VP2相似；ORF3编码一种未知功能蛋白。札如病毒根据其全基因序列可分为三个基因型和五个基因亚型。诺如病毒可[23]根据基因组的聚合酶区和衣壳蛋白区序列分为5个基因组，基因组I和基因[24]组II以及基因组IV主要感染人类，其中基因组I和基因组II是导致人急性胃肠炎暴发的主要病原体，基因组III和基因组V分别感染牛和鼠。2.2杯状病毒性腹泻流行现状杯状病毒性腹泻多由诺如病毒感染所致。由于感染剂量低(<100病毒颗粒)、缺乏持续的免疫力且人群对杯状病毒普遍易感和存在多种潜在传播途径等原因，杯状病毒感染极易形成暴发。无论在发展中国家还是发达国家，诺如病毒都有极29 文献综述苏州市诺如病毒流行病学特征分析高的感染率。美国疾病预防控制中心监测估计，食物源性胃肠炎中约30%-50%与[25]诺如病毒感染有关，急性暴发性病毒性胃肠炎中，约90%是由诺如病毒感染所[26]致，诺如病毒亦是社区散发性胃肠炎的主要病原，几乎所有人群都对诺如病毒[27]易感。2000-2004年美国疾病预防控制中心的226例病毒性腹泻粪便标本中，81%检出诺如病毒。2008年美国疾病预防控制中心的一篇系统综述报告，12%的轻[28]中度腹泻与诺如病毒感染有关。中国于1995年首次在婴幼儿腹泻患者粪便中[29]检测到诺如病毒，在我国5岁以下腹泻患儿中，诺如病毒检出率约15%，血清[30]抗体水平调查显示诺如病毒在我国人群中的感染十分普遍。近年来，我国杯状[31]病毒性腹泻发生率呈逐年上升趋势，已经在多个地方发生暴发流行。同时，由于其不可干预的特征，杯状病毒性腹泻会给5岁以下婴幼儿带来严重的危害，甚至危及生命。诺如病毒致病性高、传染性极强，具有感染剂量低、传播速度快、抗原性和基因组核苷酸序列呈高度变异以及感染后只能短时间内获得免疫保护等特点。诺如病毒通常寄生在海产品尤其是贝类中，能够在其体内进行生物蓄积，人类生吃或者食用了未经充分加热的含有该病毒的海产品后会被感染。相关研究发现，诺如病毒主要通过人传人的方式进行传播，可通过水源、食物、接触等途径在医院、学校、餐馆、军队以及家庭等人群中传播，多为二代、三代患者，一经传播可迅速引起集体暴发性腹泻。旅游者中腹泻是最常见的疾病，经统计其病原有70%由诺如病毒所导致。诺如病毒感染无地区性差异，在全世界范围内均有流行。杯状病毒性腹泻全年皆可发生，既往研究认为杯状病毒感染存在明显的季节性，其流[32]行高峰主要见于寒冷季节，但Lopman等人对英国杯状病毒性腹泻进行为期7年的回顾性研究发现，前6年冬季杯状病毒感染率较高，夏季感染率明显较低，但2002年夏季却出现一轮感染高峰，这可能是由于出现了新变异毒株所导致。诺如病毒易感人群主要是成人和婴幼儿，札如病毒主要感染5岁以下婴幼儿，免疫缺陷相关疾病患者如艾滋病患者也是杯状病毒性腹泻的易感人群。2.3杯状病毒性腹泻的临床特点诺如病毒引起的腹泻潜伏期多为24-48h，最短12h，最长可达72h。感染者起病急，临床上有食欲减退、恶心、频繁呕吐、胃胀、腹胀、腹鸣、腹部痛及腹泻等症状，以恶心、呕吐、发热、腹痛和腹泻为主要症状，其中儿童患者以呕吐30 苏州市诺如病毒流行病学特征分析文献综述为主，成人患者以腹泻为主。患者发热比例不一致，一型不发热，腹泻次数频繁；另一型发热，腹泻次数少，甚至无腹泻症状。原发性感染患者的呕吐症状明显多于续发感染者，严重者可引起脱水及酸中毒，甚至危及生命。另外还可伴有头痛、寒颤、肌痛、咽痛等症状，间有呼吸道症状。腹泻患者一般24h内可腹泻(4-8)次，粪便多为水样便，大便无粘液脓血，便检白细胞阴性。病程通常为(12-60)h，最短病程为2h，最长可达6d。儿童、老年人及院内感染患者病程较长。诺如病毒感染性腹泻具有自限性，感染者病情痊愈后一般不复发。扎如病毒性腹泻的临床特征研究相对较少，近年来研究发现，扎如病毒性腹泻的潜伏期一般为(5-100)h，平均潜伏期为58h，病程一般持续6天左右，临床症状主要表现为腹泻、呕吐、腹痛、发热以及恶心等症状。2.4杯状病毒性腹泻的防治预防杯状病毒性腹泻的关键在于切断传播途径，彻底清除污染环境。人杯状病毒流行大多源于某种食物或水的污染，再因人传人而发展，故预防措施需全面着手。既往对人杯状病毒疫苗的研究一直很缓慢，直到90年代才获得了极有价值的诺如病毒VLPs疫苗。到2006年为止，诺如病毒疫苗研制取得了重大的进展，研究者们已经提出多种以VLPs为基础的候选疫苗，总结起来大致有3种来源：第一，产生于转基因植物；第二，产生于感染杆状病毒的昆虫细胞重组体；第三，产生于感染VEE复制子的哺乳动物细胞。目前，杯状病毒疫苗研制仍在不断发展[33]和进步。3.肠道腺病毒性腹泻20世纪50年代初，Rowe等人在切除发生自发性退行性病变的儿童腺体细胞培养物中首次发现腺病毒（Adenovirus，AdV），因其最初来自于腺体，故称之为腺病毒。腺病毒是一种分布广泛，能引起呼吸道、肠粘膜上皮细胞溶解性感染的病毒，可在腺样和淋巴样细胞中引起潜伏感染。腺病毒能够感染多种宿主，人[34]类腺病毒有41个血清型，分为A-F6个型，其中A-E血清型为普通腺病毒，能够在人得组织细胞中增殖；F血清型称为肠道腺病毒（EntericAdenovirus,EAdV），是1975年Flewett等人运用电镜技术首次从急性胃肠炎患儿粪便中观察到与婴幼儿胃肠炎直接相关的腺病毒，这些腺病毒用常规细胞培养不能增[35]殖，仅在选择性细胞上生长，故称之为肠道腺病毒。31 文献综述苏州市诺如病毒流行病学特征分析3.1肠道腺病毒的病原学肠道病毒呈球形，电镜下为直径70-100nm的小颗粒，病毒中心为双链直线DNA，由直径为40-45nm的核心包裹，外层为蛋白外壳，核衣壳20面体堆成结构的12个顶角上均有一个子粒和相邻的5个子粒围绕构成五邻体，每个顶角子粒的基底部位都有一个纤突伸出，纤突含有病毒吸附蛋白，其抗原性具有特异性。其余240个壳粒是六邻体，附带亚属特异性抗原外还与五邻体和纤突组成了病毒分型和检测的主要抗原。五邻体和六邻体是腺病毒的重要抗原，在病毒检测中具[36]有重要意义。3.2肠道腺病毒性腹泻流行现状肠道腺病毒是引起婴幼儿病毒性腹泻的又一重要病原，婴幼儿腺病毒性腹泻全世界均有发生，欧洲、美洲、非洲、大洋洲以及亚洲的许多国家和地区都有从腹泻患儿粪便标本中检出腺病毒和肠道腺病毒的报道。在病毒性胃腺炎中肠道腺病毒检出率约为5％-14％。肠道腺病毒性腹泻以区域性流行为主，暴发流行较为[37]少见。我国自1995年程绪杰等人首次从腹泻患儿粪便中分离到EAdV以来，深圳、福州、青岛等地相继对腺病毒性腹泻进行过报道，报道显示中国腹泻患儿中肠道腺病毒的检出率为5%-38%。肠道腺病毒性腹泻一般呈散发，在托幼机构及住院儿科病房中可引起暴发流行。肠道腺病毒性腹泻的发病年龄以5岁以下为主，最小发病年龄为1月龄，约85%发生于3岁以下的婴幼儿。传播途径同其他腹泻病毒一样，主要经粪口途径传播，少数经呼吸道传播。以儿童感染特别是托儿机构集体感染为主。肠道腺病毒感染全年皆可发生，无明显季节性，但在部分地区有季节性升高现象，发病以夏秋季多见。检出率因时间和地区不同而波动。3.3肠道腺病毒性腹泻的临床特点肠道腺病毒性腹泻的潜伏期约为3-10天，临床主要表现为腹泻、呕吐和发热，部分患者有腹痛和呼吸道症状。儿童每天排便约8-9次，粪便量少或多，呈水样便或稀便，少数可排出粘液便。病程大部分有自限性，一般为4-8天，少数可延长至3-4周。近半数患儿在发病初期2-3天内有低热的症状，部分患者同时伴有气管炎、咽炎以及鼻炎等上呼吸道感染症状，个别患者可进展为肺炎。多数患儿32 苏州市诺如病毒流行病学特征分析文献综述病后5-7个月内对蔗糖不耐受，并可伴有吸收不良。某些患者失水较严重，个别重度失水者可死亡。肠道腺病毒性腹泻一般不治自愈，主要是对症治疗及必要的支持疗法，有轻度失水者可口服补液，中度或重度失水宜静脉补液。4.星状病毒性腹泻星状病毒是引起人类、犬、猫、水豹等多种动物呕吐、腹泻、发热等症状的主要原因之一。人类星状病毒于1975年由APPleton和Higgins首次用电镜检测胃肠炎患儿粪便标本时发现，由于电镜下病毒颗粒呈星形,因此被命名为星状病[38]毒。尽管人们认识和了解星状病毒已有二十几年，然而在很长一段时间内人们都持有该病毒只能引起散发的病例，而不会导致暴发流行的错误观点，再加上星状病毒检测手段有限且敏感性不高，导致了星状病毒在很长一段时间内未受到充分的重视。近年来，随着分子生物学技术的不断发展，逐渐深入的研究星状病毒后，人们发现星状病毒是近年来发现的引起婴幼儿急性腹泻的主要病原之一。4.1星状病毒的病原学星状病毒属星状病毒科，为球形病毒，电镜下表面结构呈五角或六角星形，是无囊膜的单股正链RNA病毒，病毒直径约28-30nm。病毒基因组全长约为6.8kb，包括一个5′非编码区、一个3′非编码区、三个开放读码框（ORF1a、ORF1b和ORF2）和一个多聚A的尾巴。ORF1a、ORF1b和ORF2分别编码神经氨酸酶、RNA依赖的RNA聚合酶以及衣壳蛋白前体，其中神经氨酸酶、RNA依赖的RNA聚合酶为非结构蛋白，ORF2编码的衣壳蛋白前体为结构蛋白。根据其衣壳蛋白抗原性不同，可将人星状病毒分为8个血清型，相对应于8个基因型，其中1型最为常见。近几年，相关研究又发现了人星状病毒的新的血清型，如AstV-VA1、MLB1、MLB2、VA2和VA3等。4.2星状病毒性腹泻流行现状目前，世界各地均有星状病毒感染的报道，星状病毒导致的腹泻既可散发也可暴发流行，星状病毒性腹泻己被证实是婴幼儿、老年人及免疫缺陷病人发生腹泻的重要病原之一。星状病毒广泛分布于世界各地，各血清型流行情况因地区和[39]流行年份不同而有所不同，其中多以血清型1型为主。Lee等对英国某些地区星状病毒流行情况研究发现，除1991年以血清型2型为主外，其余几年均是以[40][41]血清型1型为主，其比例高达66.7%。美国、澳大利亚、智利、日本、孟加33 文献综述苏州市诺如病毒流行病学特征分析[42]拉等国也均以1型血清型为主。中国七个地区1998-2005年急性腹泻住院患儿星状病毒感染研究发现，中国婴幼儿星状病毒以Ⅰ型血清型为主要流行毒株，同时存在多个型别的散在流行。星状病毒性腹泻既可散在发生，也可暴发流行。病毒感染者、病毒携带者、患病动物以及被污染的食物、水等都可成为传染源。星状病毒性腹泻的主要传播途径为粪口途径，易感人群主要为婴幼儿，发病年龄大多集中在1个月至2岁之间。无症状携带病毒的婴幼儿可引起托儿所等婴幼儿聚集场所星状病毒性腹泻的暴发流行。同轮状病毒性腹泻相似，星状病毒感染也具有明显的季节性，在温带地区星状病毒感染多发生在冬季，在热带地区[43]则以雨季为主。4.3星状病毒性腹泻的临床特点星状病毒性腹泻与轮状病毒性腹泻的临床表现相似，潜伏期约为1-3天，而后逐渐出现腹痛、腹泻、呕吐及发热等症状，粪便性状主要表现为水样便，病程持续约3-5天。单纯感染星状病毒的患者症状一般较轻，通常不会发生脱水、酸碱中毒等严重并发症，而合并感染其他肠道病毒如轮状病毒、杯状病毒者则病程[44]较长、症状更为严重，此外也常有隐性感染的报道。最近，在某些动物实验的[45]结果中发现，星状病毒感染能够对机体产生生长抑制作用，同时还会出现胸腺[46]萎缩及吞噬细胞吞噬功能抑制等免疫抑制作用，导致机体出现继发感染。目前，这种有害作用尚未在人类中发现。另外，相关研究还发现星状病毒可引起心脏、肾脏及脑等多器官功能损害。目前，星状病毒性腹泻尚无特异性治疗措施，症状较轻者只需对症处理，一般经数天病情即可自愈。星状病毒合并轮状病毒等其他病毒感染或症状较重者，需采取补液治疗以及支持疗法等综合治疗措施以预防脱水及其他严重并发症的发生，另外还可采用对轮状病毒性腹泻有效的免疫疗法和生物制剂如乳酸杆菌、双歧杆菌等对星状病毒性腹泻进行治疗。免疫功能低下或免疫功能缺陷者还可酌情采用免疫球蛋白法进行治疗。34 苏州市诺如病毒流行病学特征分析参考文献[1]Farthing,Lindberg,P.Diteetal,er.WGOPracticeGuidelines:AcuteDiarhea[M].WorldGastroenterologyofOrganization,2008:1-3.[2]TomblomH,HolmvallP,SvenungssonB,etal.Gastrointestinalsymptomsafterinfectiousdiarrhea:afive-yearfollow-upinaSwedishcohortofadults[J].ClinicalGastroenterologyHepatology,2007,5(4):461-464.[3]MurrayCJ,LopezAD.Alternativeprojectionsofmortalityanddisabilitybycause1990-2020:GlobalBurdenofDiseaseStudy[J].Lancet,1997,349(9064):1498-1504.[4]MaL，GaoYJ，WangZJ，etal.Analysisofthepathogensininfectiousdiarhea(otherthancholera，dysentery，typhoidandparatyphoid)casesreportedinChinain2009［J］.ChineseJournalofMicroecology，2010，22(7):658－661，665.[5]Who.Theworldhealthreport:2003:shapingthefuture[J].Genva,2003:11-12.[6]DennehyPH.Viralgastroenteritisinchildren［J］.PediatrInfectDisJ，2011，30(1):63－64.[7]VanRegenmortelMH,International,FauquetCM.Virustaxonomy(classificationandnomenclatureofviruses)[M].AcademicPressofElsevier,2012:603-613.[8]HungT,ChenGM,WangCG,etal.Rotavirus-likeagentinadultnon-bacterialdiarrheainChina[J].Lancet,1983,2(8358):1078-1079.[9]WangDK,ZhangQ,SunLW,etal.GeneticvariationinVP7geneofrotavirusstrotypeG3prtdominatedinChangchun,China[J].BingDuXueBao,2008,24(1):22-27.[10]FangZY,YangH,QiJ,etal.DiversityofrotavirusstrainamongchildernwithacutediarrheainChina:1998-2000surveillancestudy[J].JClinMicrobiol,2002,40(5):1875-1878.[11]GentschJR,WoodsPA,RamachandranM,eral.ReviewofGandTtypingresultsfromaglobalcollectionofrotavirusstrains:implicationsforbaccinedevelopment35 苏州市诺如病毒流行病学特征分析[J].JInfectDis,1996,174(suppl):30-36.[12]王承训,刘愉,孙利伟.等.长春地区婴幼儿腹泻轮状病毒分型研究[J].中国实验诊断学,2002,6(1):42-44.[13]CorteseMM,ParasharUD,Preventionofrotavirusgastroenteritisamonginfantsandchildren:recommendationsoftheAdvisoryCommitteeonImmunizationPractices(ACIP)[J].MMWRRecommRep,2009,58(RR-2):1-25.[14]ParasharUmeshD,BurtonA,LanataC,Boschi-PintoC,ShibuyaK,SteeleD,BirminghamM,GlassRogerI.GlobalMortalityAssociatedwithTotavirusDiseaseamongChildrenin2004.TheJoumalofInfectiousDiseases.2009:200(sl):9-15.[15]AndersonEJ.Preventionandtreatmentofviraldiarrheainpediatrics[J].ExpertRevAntiInfectTher.2010,8(2):205-217.[16]DuanZj,LiuN,YanSh,etal.Hospital-BasedSurveillanceofRotavirusDiarrheainthePeople’sTepublicofChina,August2003-July2007[J].TheJournalofInfectiousDiseases.2009,200(sl):167-173.[17]NaghipourM,NakagomiT,NakagomiO.Issueswithreducingtherotavirus-associatedmortalitybyvaccinationindevelopingcountries[J].Vaccine.2008,26(26):3236-324.[18]庞其方,丘福喜,俞富荣,等.婴幼儿秋季急性胃肠炎病原-轮状病毒的研究[J].中华医学杂志.1979,59(10):589-593.[19]LuoX(罗璇)，JinY，LiYN，etal.Molecularandepide-miologicalstudyonviraldiarrheaamonginfantsinLanzhou.ChineseJExpClinVirol(中华实验和临床病毒学杂志)，2011，25(1):36-37[20]DeySK，PhathammavongO，OkitsuS，etal.SeasonalpatternandgenotypedistributionofnorovirusinfectioninJapan［J］.PediatrInfectDisJ，2010，29(5):e32－e34.[21]O’HalloranF,LynchM,CryanB,etal.MolecularcharacterizationofrotavirusinIreland:detectionofnovelstrainscirculatinginthepopulation[J].JClinMicrobiol,36 苏州市诺如病毒流行病学特征分析2000,38(9):3370-3374.[22]ChibaS,NakataS,Numata-KinoshitaK,HonmaS.Sapporovirus:historyandrecentfindings[J].JInfectDis.2002,181(suppl):303-308.[23]ShihoA,TungGP.IdentificationofSapovirusInfectionamongJapaneseInfantsinaDayCareCenter[J].JofMedVirol,2005,77(8):595-60[24]MayoMA.AsummaryoftaxonomicchangesrecentlyapprovedbyCTV[J].ArchViml,2002,147(8):1655-1663.[25]FankhauserRL,MonroeSS,NoelJS,HumphreyCD,BreseeJS,ParasharUD,AndoT,GlassRL.Epidemiologicandmoleculartrendsof“Norwalk-likevirus”associatedwithoutbreaksofgastroenteritisintheUnitedStates[J].JInfectDis.2002,186(1):1-7.[26]BlantonLH,AdamsSM,BeardRS,WeiG,BulensSN,WiddowsonMA,GlassRI,MonroeSS.MolecularandepidemiologictrendsofcalicivirusesassociatedwithoutbreaksofacutegastroenteritisintheUnitedStates,2000-2004[J].JournalofInfectiousDiseases.2006,193(3):413-42[27]AtmarRL,EstesMK.Theepidemiologicandclinicalimportanceofnorovirusinfection[J].GastroenterolClinNorthAm.2006,35(2):275-290.[28]PatelMM,WiddowsonMA,GlassRI,AkazawaK,VinjeJ,ParasharUD.Systematicliteraturereviewofroleofnorovirusesinsporadicgastroenteritis.EmergInfectDis.2008,14(8):1224-123[29]方肇寅温,晋圣瑾,等.Norwalk-likevirusinfectionfoundinDiartheapatientsinChina[J].病毒学报,1995,11(3):215-219.[30]方肇寅,谢华萍,吕红霞,等.1999-2005年我国婴幼儿杯状病毒腹泻研究[J].病毒学报.2007,23(1):9-15.[31]KronemanA,VennemaH,HarrisJ,et,al.IncreaseinnorovirusactivityreportedinEurope[J].EuroSurveill.2006,11(12):E061214[32]HansmanGS,SanoD,UekiY,etal.DaisukeS.Sapovirusinwater,Japan[J].EmergInfectDis,2007,13(1):133-135.[33]BaricRS,YountB,LindesmithL,etal.Expressionandself-assemblyofNorwalkviruscapsidproteinfromVenezuelanepuineencephalitisvirusreplicons[J].Virol,2002,76(6):3023-3030.37 苏州市诺如病毒流行病学特征分析[34]JonesMS,HarrachB,GanacRD,etal.Newadenovirusspeciesfoundinapatientpresentingwithgastroenteritis[J].Journalofvirology,2007,81(11):5978-5984.[35]HKA,R,MC.Invitrogrowthofsomefastidiousadenvirusesfromstoolspecimens[J].ClinPathol,1981,34:4.[36]贾辅忠,李兰娟.感染病学[M].南京：江苏科学技术出版社,2010:328-330.[37]程绪杰,王树惠,张云,等.我国肠道腺病毒的分离与鉴定[J].中国医学科学院学报,1995,17(1):16-19.[38]MoeCL,AllenJR,MonroeSS,etal.DetectionofastrovirusinPediatricstoolsamplesbyimmunoassayandKNAprobe[J].ClinMieroblol,1991,29:2390-2395.[39]LeeTW,KurtzJB.PrevalenceofhumanastrovirusserotypesintheOxfordregion1976-1992withevidencefortwonewserotypes[J].EpidemiolInfect,1994,112:187-193.[40]ShaatrisS,DoaneAM,GonzalesJ,etal.Prevalenceofastrovirusinachildren’shospital[J].ClinMicrobiol,1998,36:2571-2574.[41]UtagawnET,NishezawnS,SekineS,etal.AstrovirusasacauseofgastroenteritisinJapan[J].ClinMicrobiol,1996,32:1841-1845.[42]UnicombLE,BanuNN,AzimT,etal.Astrovirusinfectioninassociationwithacute,persistentandnonsocomialdiarheainBangladesh[J].PediatrInfectDisJ,1998,17:611-614.[43]MaldonadoY,Cantwellm,OldM,etal.Population-basedprevalenceofsymptomaticandasymptomaticastrovirusinfectioninruralMayaninfants[J].InfectDis,1998,178:334-339.[44]何国芳.星状病毒感染的研究现状[J].安徽医药,2004,8(4):297-298.[45]BehlingKE,SchultzCS,KociM,etal.Localizationofastrovirusinexperimentallyinfectionturkeysasdeterminedbyinsituhybridization[J].VetPathol,2002,39:595-598.[46]KociMD,MoserLA,KelleyLA,etal.Astrovirusinducesdiarrheaintheabsenceofinflammationandcelldeath[J].Virol,2003,77(21):11798-11808.38 苏州市诺如病毒流行病学特征分析39 学习期间发表的文章苏州市诺如病毒流行病学特征分析学习期间发表的文章江苏省苏州市2012年病毒性腹泻病原学特征分析[J].上海预防医学,2015(07):402-403.40 苏州市诺如病毒流行病学特征分析常见英文缩略语说明常见英文缩略语说明英文缩写英文全称中文全称RVrotavirus轮状病毒NVNorovivus诺如病毒SaVSapporolikeVirus札如病毒AdVAdenovirus腺病毒AstVAstrovirus星状病毒RBCredbloodcell红细胞WBCwhitebloodcellPCRphlymerasechainreaetion聚合酶链式反应PBSphosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液RNAribonucleicacid核糖核酸41 致谢苏州市诺如病毒流行病学特征分析致谢在硕士学位论文即将完成之际，我向曾经给予我帮助和支持的人们表示衷心的感谢。首先，要感谢我的导师董晨老师，在课题确定、开题报告、现场实施、论文框架、论文撰写和论文答辩等环节给予的悉心指导，使我顺利完成论文。在科研方面，董老师踏实的作风、严谨的治学态度更让我受益匪浅，是我一生学习的榜样。在此谨向董老师致以诚挚的谢意和崇高的敬意。感谢苏州大学附属儿童医院医生及护士认真负责地完成收集标本的工作并在进行了相关资料的填写，感谢江苏省疾病预防控制中心的相关领导及实验室人员付建光老师，他们完成了核酸提取、RT-PCR检测、琼脂糖凝胶电泳鉴定、序列分析等检测工作。再次感谢大家对我的支持与帮助，使我的论文得以顺利完成。同时向所有帮助和支持过我的同事表示感谢，感谢他们对我思想、学习和生活上给予的帮助。最后，深深感谢我的家人对我学习和工作给予的支持和鼓励。42 ；苏州大学硕士学位论文（专业学位）’＊＇一１二．：，＇＂＇——Ｖ■．Ｖ－．？，：一…二ｔ二＇＊Ｘ．‘＇苏州大学研究生院统一印制．
